프랑스 서부 지역의 전립선암에 대한 구조적 네트워크 (RESCAP)

관련성 및 전략적 접근 방식 전립선암(PCa)은 남성에서 가장 흔한 암이며 서방 국가에서 암 사망의 두 번째 주요 원인입니다. 알려진 위험 요소는 고령, 민족적 기원 및 질병의 긍정적인 가족력입니다(1). 유럽계 미국인(EA) 남성(2)과 비교하여 아프리카계 미국인(AA) 남성의 발병률이 60% 더 높은 PCa 위험에는 상당한 인종적 차이가 있습니다(2). 마찬가지로 주민의 90% 이상이 아프리카계인 프랑스 서인도 제도에서는 PCa 발생률이 프랑스의 나머지 지역보다 두 배 높습니다(3). 비만, 식이요법, 약물 및 살충제를 포함한 많은 생활 방식, 환경 및 직업 관련 위험 요인이 PCa 병인과 관련되어 있지만 그 역할은 불분명합니다(4). 현재 연구에 따르면 PCa에서 원인이 되는 역할을 하는 유전적 요인과 환경적 요인의 복잡한 상호 작용이 있음을 시사합니다.

PCa는 또한 매우 이질적인 진화 가능성을 가지고 있습니다. 일부 암은 공격적인 방식으로 행동하는 반면, 다른 환자는 어떠한 치료도 필요로 하지 않는 나태한 형태의 질병을 앓게 됩니다. 임상 병기, 생검의 글리슨 점수, 혈청 전립선 특이 항원(PSA) 또는 근치 전립선 절제 표본 분석 후: 병리 병기 및 외과적 글리슨 점수 (5). 그러나 이러한 예후 인자의 가치에도 불구하고 공격성의 잠재력은 진단 시 평가하기 어렵고 중간 위험 그룹으로 분류된 환자는 종종 관리하기 어려운 조기 치료 조작을 위한 새로운 마커 및 새로운 대상을 발견하는 데 어려움이 있습니다.

유전적 요인과 환경적 요인 모두 공격적인 질병의 위험과 관련이 있습니다. 전이 단계에서 진단된 사례의 비율이 유럽계 미국인 환자(22%)보다 아프리카계 미국인 환자(35%)에서 더 높고 2.4배로 보고되기 때문에 민족적 기원이 역할을 할 가능성이 있습니다. EA 남성보다 AA 남성의 사망률이 더 높습니다(2). 유전적 요인과 함께 환경 요인도 PCa 진행에 중요한 역할을 하는 것으로 보입니다. 비만과 같은 일부 환경 요인은 공격적인 PCa와 관련이 있습니다(6). 그러나 유전적 및 환경적 요인의 역할과 PCa 공격성에서의 상호 작용에 대해 많은 연구가 남아 있습니다. 백색 지방 조직(WAT)과 지질은 여러 수준에서 PCa의 발달 및/또는 진행에 잠재적으로 관여합니다.

WAT는 대사 활성 내분비 기관입니다. 지방세포는 아디포카인(adipokine)이라고 하는 다양한 호르몬, 생리활성 펩타이드 및 사이토카인을 분비합니다(9). 렙틴, 인터류킨 IL-6 및 혈관 내피 성장 인자(VEGF)를 포함하여 여러 아디포카인이 PCa 진행 및 공격성을 유발하는 메커니즘에 관여했습니다.

내분비 교란 물질의 보관. 내분비 교란 물질(ED)은 전립선암에 관여하는 것으로 생각됩니다(10). 그러나 ED에 대한 환경적 노출 사이의 긍정적인 연관성에 대한 역학적 증거는 제한적입니다. 지속적인 오염 물질을 모니터링하기 위해 혈장 또는 복부 지방을 사용하는 두 가지 연구에서 PCa 위험(트랜스클로르단, 베타-헥사클로로사이클로헥산, 트랜스-노나클로르, 디엘드린 및 폴리염화 비페닐 153)과 긍정적인 연관성이 나타났습니다(11, 12). 프랑스 서인도 제도에서 수행된 최근 연구에 따르면 에스트로겐 특성이 잘 정의된 유기염소계 살충제인 클로르데콘은 PCa의 위험을 증가시키고 PCa의 양성 가족력이 있는 피험자에서 질병의 공격적인 형태와 관련이 있습니다(13) .

WAT 구성: 리피돔. 영양소 중에서 식이 지질은 식이 개입 연구(19-22) 동안 평가된 바와 같이 WAT의 전체 지질 구성의 주요 결정 요인입니다. 지방산 중에서 필수 다중불포화 지방산(PUFA)은 n-6 및 n-3 지방산의 두 그룹으로 나누어지는 생리 활성 성분의 하위 클래스입니다. n-6 계열에는 전구체 리놀레산(LA, 18:2n-6)이 포함됩니다. n-3 계열에는 전구체 알파-리놀렌산(ALA, 18:3n-3) 및 고도로 불포화된 유도체가 포함됩니다. WAT의 지방산 조성은 과거 지방산 섭취량을 반영하는 것으로 나타났습니다(23). 총 식이 지방 섭취와 PCa 위험 사이의 연관성을 보여주는 결정적인 연구는 없지만 특정 유형의 식이 지방(동물성 지방)이 PCa 위험을 증가시키는 데 더 중요한 것으로 보입니다(6, 28). 생선 소비(장쇄 오메가-3 PUFA가 풍부함)와 전립선암 위험 감소 사이의 연관성은 논란의 여지가 있지만 전립선암 관련 사망률의 상당한 감소가 설명되었습니다(29). 전립선 조직의 PUFA 구성을 분석한 이전 연구에서는 상충되는 결과가 나왔습니다. 그러나 WAT의 지방산 구성은 공격성 및 진행과 관련하여 PCa에서 연구된 적이 없습니다.

이 프로그램의 목적은 전립선암 관리 및 연구에 전념하는 임상의, 병리학자 및 과학자를 연결하는 네트워크를 구성하는 것입니다. 이 네트워크는 전립선 및 지방 조직 샘플을 포함하여 표준화된 생체 자원 수집과 함께 근치 전립선 절제술로 치료받은 PCa 환자의 다중 중심 중앙 데이터베이스를 생성합니다. 바이오 자원의 사용은 주로 지방 조직/지질과 PCa 공격성 사이의 관계를 지향합니다.

이 프로젝트는 PCa 공격성과 골반 지방 조직의 구성 사이의 연관성을 특성화하는 것을 목표로 합니다. 저위험(n=100) 또는 공격적(n=100) PCa 환자의 지방 조직 샘플은 1/ 지질 프로파일(지방산 조성 및 인지질 비율), 2/ 아디포카인 발현 및 3/ 지속성에 대해 분석됩니다. 호르몬과 유사한 활동을 하는 유기 오염 물질. 분석은 비만, MetS 구성 요소, 인종-지리적 기원 및 질병의 긍정적인 가족력을 ​​포함하여 알려진 공격성 요인을 고려할 것입니다.

구현된 방법론 및 기술 I- 데이터베이스 구성 및 생물 자원 수집 네트워크의 7개 임상 센터에서 근치 전립선 절제술로 치료받은 각 전립선암 환자가 코호트에 포함됩니다. 지난 3년 동안 이 센터의 수술 활동을 감안할 때 18개월 후 약 250명의 아프리카-카리브인 환자와 함께 최소 1000개의 포함이 예상됩니다. 표준화된 임상, 생물학적 및 병리학적 데이터는 중앙 관리 및 검증(팀 13)이 있는 각 센터(Clinsight®). 데이터 입력을 위한 임상팀(임상 연구 전문 기술자)에게 재정적 지원이 제공됩니다.

일반적으로 PCa와 관련된 데이터는 데이터베이스에 입력됩니다: 관리 항목(이름, 생년월일, 주소, 병원 번호, 병리 번호), 수술 전 PSA, 임상 단계, 병리 항목(검체의 무게 및 크기, 병리 단계 포함) 림프절 상태, 글리슨 점수, 4등급 또는 5등급의 %, 주요 초점의 더 큰 축, 마진 상태) 및 추적 항목(생물학적 및 임상 모두). 다음 항목도 지정됩니다: BMI, 허리 둘레, 공복 혈당, 혈압, 순환 지질(트리글리세리드, 총 콜레스테롤, LDL 및 HDL 콜레스테롤), 진행 중인 치료(지질 저하제, HTA, 당뇨병 치료), 민족지리적 기원 및 PCa 가족력 수술 절차 중 3개 골반 지방 조직(Axis 1의 task 1, 2, 3에 대해 각각 약 5g, 2g, 2g)을 샘플링하여 생물 자원 센터로 보내고 즉시 -80°C에서 동결합니다. 조사관은 내장 지방세포가 대사적으로 더 활동적이기 때문에 피하 WAT 대신 내장 WAT를 샘플링하기로 선택했습니다(8). 내장 WAT 중에서 조사관은 방광 주위의 지방이 항상 매우 풍부하고 수술 중에 쉽게 채취할 수 있기 때문에 방광 주위 지방 조직을 샘플링하기로 선택합니다. 전립선 검체는 즉시 병리과로 이송되어 표준화된 방식으로 관리됩니다.

코호트에 포함된 환자는 정보에 입각한 동의서(윤리 위원회/IRB의 동의 후)에 서명해야 합니다. 프로그램에 포함된 주제에 관한 주석이 달린 바이오 리소스는 CNIL에서 정의한 규칙에 따라 관리됩니다.

M18에서 예상되는 1000명의 환자 코호트로부터 공격성 또는 저위험 질병을 가진 환자를 선택하면, 매우 공격적인 질병을 가진 100명의 환자가 선택될 것입니다. 고위험 질병, 주로 고등급 PCa(Gleason 점수 8 이상) 및/또는 병기 pT3의 기준에 따라 선택됩니다. 이 100명의 환자 각각은 나이가 같은 상태(50세 이하, 51-55, 56-60, 61-65, 66-70, 71-75, 75세 이상) 및 BMI(정상, 과체중 및 비만). 무통성 질환의 기준은 수술 전 PSA < 10ng/ml, Gleason 점수 6 이하(수술 표본에서) 및 pT2 단계를 포함합니다. 만약 여러 개의 나태한 케이스가 1개의 공격적인 케이스와 매치될 수 있다면, 더 작은 종양 크기를 가진 케이스가 선호될 것입니다. 이 200명의 환자로부터 채취한 지방 조직이 사용될 것입니다.

목표는 공격적이고 중요한 PCa와 지방 조직의 구성 사이의 연관성을 식별하는 것입니다. 연구자들은 지속성 유기 오염 물질(과거 누적 노출을 반영) 및/또는 지질 구성(과거 섭취를 반영)이 아디포카인 발현과 함께 질병 공격성과 관련될 수 있다고 가정합니다. PCa 공격성의 알려진 요인(민족적 기원, 가족력 및 비만 상태)이 고려됩니다.

작업 1: 지질체 분석 지방 조직 샘플에 대해 수행되는 분석은 i) 트리글리세리드 지방산 조성 및 ii) 지방 세포 막 인지질 등급의 상대적인 양입니다. 지방 세포의 원형질막에서 발견되는 5가지 주요 인지질 부류인 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜이노시톨, 포스파티딜세린 및 스핑고미엘린을 분리하고 정량화할 수 있습니다. 지방 조직은 대부분 트리아실글리세롤과 약 1%의 인지질로 구성되어 있기 때문에 막 인지질 연구에는 일반적으로 트리글리세리드 지방산 조성 분석(400-500mg)에 필요한 것보다 더 많은 양의 샘플(5g)이 필요합니다.

지방 조직 샘플은 클로로포름과 메탄올을 사용하여 지질 추출을 수행합니다(Folch 방법에 따름). 간단히 말해서 전체 추출물은 진공 건조된 다음 헥산과 메탄올의 혼합물에서 재가용화되어 중성(헥산 용해성) 및 극성(메탄올 용해성) 지질을 분할합니다. 헥산 상의 트리글리세라이드는 실리카겔 플레이트 상의 박층 크로마토그래피에 의해 다른 중성 또는 극성 지질로부터 추가로 정제될 것입니다. 정제된 트리글리세리드는 메탄올 에스테르 교환 반응을 거쳐 휘발성 지방산을 메틸 에스테르로 생성합니다. 지방산의 분리 및 정량화는 가스 크로마토그래피(BPX-70 상 모세관 컬럼, 컬럼 주입, 불꽃 이온화 검출기)에 의해 수행됩니다.

작업 2: 아디포카인 측정 지방 조직 샘플의 총 RNA는 Trizol 기술로 추출하고 RNA 품질은 겔 아가로스 전기영동으로 확인하고 NanoDrop으로 정량화합니다. 인코딩된 mRNA를 cDNA로 역전사한 후 역전사 PCR 증폭의 제어 품질은 하우스키핑 유전자를 사용하여 낮은 사이클 수로 수행하고 겔 아가로스로 새로운 제어를 수행합니다. 그런 다음 실시간 정량적 PCR을 9개의 관심 유전자(아디포카인)와 정규화를 위한 3개의 하우스키핑 유전자(18S, 베타-액틴 및 SDHA)에 대해 3중으로 수행합니다(즉, 생성된 10,800점). PCR은 384-웰 플레이트에서 이루어지며 반응 혼합물은 로봇 분배에 의해 분배됩니다. 단백질 4(RBP4), 종양 괴사 인자-알파(TNF 알파), 비스파틴, 렙틴, 아디포넥틴, 아펠린.

과제 3: 잔류성 유기 오염물질(유기염소계 살충제) 측정 대상 유기코린계 살충제를 측정하는 데 사용되는 분석 방법론은 다이옥신 및 PCB 화합물과 같은 다른 종류의 친유성 잔류성 유기 오염물질에 대해 이전에 개발, 검증 및 인증된 절차에서 파생됩니다. 간단히 말해서 가속 용매 추출(ASE)을 사용하는 예비 단계는 활성화된 실리카 및 셀라이트 컬럼에서 연속적인 정제 단계로 이어질 것입니다. 측정은 고분해능 및/또는 탠덤 질량 분석법(GC-HRMS, GC-MS/MS)과 결합된 가스 크로마토그래피를 사용하여 수행됩니다. 정량화는 동위원소 희석 방법(즉, 내부 표준과 유사한 13C 라벨 사용)에 따라 달성됩니다. 주요 대상 물질의 선택은 약 12개의 주요 우려 살충제를 나열하는 스톡홀름 협약을 기반으로 예비적입니다.

다기관 표준화 임상 및 생물학적 데이터베이스는 공격적이거나 잠재적으로 나태한 질병의 특징을 가진 2개의 동종 PCa 환자 그룹을 식별합니다. 연구자들은 골반 지방 조직의 분석이 1/ 지질(식이 요법 반영), 2/ 아디포카인 및 3/ 저장된 Xenobiotics의 일부 범주가 PCa 공격성의 더 크거나 낮은 위험과 우선적으로 연관되는지 여부를 입증할 것으로 기대합니다. 이러한 식별은 예방 전략으로 이어질 수 있습니다.