Структурная сеть по раку простаты в регионе Большого Запада Франции (RESCAP)

Актуальность и стратегический подход Рак предстательной железы (РПЖ) является наиболее распространенным видом рака у мужчин и второй ведущей причиной смерти от рака в западных странах. Известными факторами риска являются пожилой возраст, этническое происхождение и положительный семейный анамнез заболевания (1). Существуют значительные этнические различия в риске РПЖ, при этом уровень заболеваемости среди афроамериканцев (АА) на 60% выше, чем у мужчин европейского происхождения (ЭА) (2). Точно так же во Французской Вест-Индии, где не менее 90% жителей имеют африканское происхождение, заболеваемость РПЖ в два раза выше, чем в остальной части Франции (3). Многие факторы риска, связанные с образом жизни, окружающей средой и профессиональной деятельностью, включая ожирение, диету, лекарства и пестициды, связаны с этиологией РПЖ, но их роль остается неясной (4). Текущие исследования показывают, что существует сложное взаимодействие генетических факторов и факторов окружающей среды, которые играют причинную роль в РПЖ.

PCa также обладает весьма гетерогенным эволюционным потенциалом. В то время как некоторые виды рака будут вести себя агрессивно, другие пациенты будут иметь вялотекущую форму заболевания, которая не потребует никакого лечения. Несколько параметров используются для прогнозирования риска развития у пациентов с РПЖ либо до любого лечения: клиническая стадия, балл Глисона при биопсии и сывороточный простатический специфический антиген (ПСА), либо после анализа образцов радикальной простатэктомии: патологическая стадия и хирургическая стадия Глисона. оценка (5). Однако, несмотря на ценность этих прогностических факторов, потенциал агрессивности по-прежнему трудно оценить при постановке диагноза, а пациентов, отнесенных к группе промежуточного риска, часто трудно вести. Существует проблема обнаружения новых маркеров и новых мишеней для ранних терапевтических манипуляций.

Как генетические, так и экологические факторы связаны с риском развития агрессивного заболевания. Этническое происхождение, вероятно, играет определенную роль, поскольку, как сообщается, доля случаев, диагностированных на стадии метастазирования, выше у афроамериканских пациентов (35%), чем у европейско-американских пациентов (22%). более высокая смертность у мужчин с AA, чем у мужчин с EA (2). Наряду с генетическими факторами факторы окружающей среды, по-видимому, также играют ключевую роль в прогрессировании РПЖ. Некоторые факторы окружающей среды, такие как ожирение, связаны с агрессивным РПЖ (6). Однако многое еще предстоит выяснить о роли генетических факторов и факторов окружающей среды и их взаимодействии в агрессивности РПЖ. Белая жировая ткань (WAT) и липиды потенциально вовлечены в развитие и/или прогрессирование РПЖ на многих уровнях.

ВАТ является метаболически активным эндокринным органом. Адипоциты секретируют различные гормоны, биоактивные пептиды и цитокины, называемые адипокинами (9). Несколько адипокинов участвуют в механизмах, ведущих к прогрессированию и агрессивности РПЖ, включая лептин, интерлейкин IL-6 и фактор роста эндотелия сосудов (VEGF).

Хранение эндокринных разрушителей. Считается, что эндокринные разрушители (ЭД) связаны с раком предстательной железы (10). Однако эпидемиологические данные о положительной связи между воздействием окружающей среды и ЭД ограничены. Два исследования с использованием плазмы крови или абдоминального жира для мониторинга стойких загрязнителей показали положительную связь с риском РПЖ (трансхлордан, бета-гексахлорциклогексан, транс-нонахлор, дильдрин и полихлорированный бифенил 153) (11, 12). Недавнее исследование, проведенное во Французской Вест-Индии, показало, что хлордекон, хлорорганический пестицид с ярко выраженными эстрогенными свойствами, повышает риск РПЖ и связан с агрессивной формой заболевания у лиц с положительным семейным анамнезом РПЖ (13). .

Состав ВАТ: Липидом. Среди нутриентов пищевые липиды являются основными детерминантами общего липидного состава WAT, как это оценивалось в исследованиях диетических вмешательств (19-22). Среди жирных кислот незаменимые полиненасыщенные жирные кислоты (ПНЖК) представляют собой подкласс биологически активных компонентов, разделенных на две группы: n-6 и n-3 жирные кислоты. Серия n-6 включает предшественник линолевой кислоты (LA, 18:2n-6). Серия n-3 включает предшественник альфа-линоленовой кислоты (ALA, 18:3n-3) и сильно ненасыщенные производные. Было показано, что состав жирных кислот WAT отражает потребление жирных кислот в прошлом (23). Хотя убедительных исследований, показывающих связь между общим потреблением жиров с пищей и риском РПЖ, не проводилось, определенные виды пищевых жиров (животных жиров) оказываются более значительными в увеличении риска РПЖ (6, 28). Связь между потреблением рыбы (богатой длинноцепочечными омега-3 ПНЖК) и более низким риском рака предстательной железы является спорной, но было описано значительное снижение смертности от рака предстательной железы (29). Предыдущие исследования, анализирующие состав ПНЖК в тканях предстательной железы, привели к противоречивым результатам. Однако жирнокислотный состав WAT никогда не изучался при РПЖ в связи с агрессивностью и прогрессированием.

Целью программы является создание сети, объединяющей клиницистов, патологоанатомов и ученых, занимающихся лечением и исследованиями рака предстательной железы. Сеть создаст многоцентровую централизованную базу данных пациентов с РПЖ, перенесших радикальную простатэктомию, со стандартизированным набором биоресурсов, включая образцы предстательной железы и жировой ткани. Использование биоресурсов будет ориентировано главным образом на взаимосвязь между жировой тканью/липидами и агрессивностью РПЖ.

Проект направлен на определение связи между агрессивностью РПЖ и составом тазовой жировой ткани. Образцы жировой ткани от пациентов с низким риском (n = 100) или агрессивным (n = 100) РПЖ будут проанализированы на 1/ липидный профиль (состав жирных кислот и пропорции фосфолипидов), 2/ экспрессию адипокинов и 3/ стойкий органические загрязнители с гормоноподобной активностью. Анализ будет учитывать известные факторы агрессивности, в том числе ожирение, компоненты МС, этногеографическое происхождение и положительный семейный анамнез заболевания.

Применяемые методики и методики I- Состав базы данных и коллекции биоресурсов В когорту будет включен каждый пациент с раком предстательной железы, пролеченный методом радикальной простатэктомии в 7 клинических центрах сети. Учитывая хирургическую деятельность этих центров в течение последних 3 лет, через 18 месяцев ожидается как минимум 1000 включений с примерно 250 афро-карибскими пациентами. Стандартизированные клинические, биологические и патологические данные будут введены в общую централизованную электронную ИРК, каждый центр (Clinsight®) с централизованным управлением и проверкой (команда 13). Финансовая поддержка будет предоставлена ​​клиническим командам для ввода данных (специалистам, специализирующимся на клинических исследованиях).

Данные, обычно связанные с РПЖ, будут введены в базу данных: административные элементы (имя, дата рождения, адрес, номер больницы, номер патологии), предоперационный ПСА, клиническая стадия, патологические элементы (масса и размер образца, патологическая стадия, включая состояние лимфатических узлов, оценка по шкале Глисона, % от степени 4 или 5, большая ось основного очага, состояние края) и последующие элементы (как биологические, так и клинические). Также будут указаны следующие элементы: ИМТ, окружность талии, глюкоза натощак, артериальное давление, циркулирующие липиды (триглицериды, общий холестерин, холестерин ЛПНП и ЛПВП), текущее лечение (липидоснижающие препараты, HTA, лечение диабета), этногеографическое происхождение и семейный анамнез РПЖ Во время хирургических процедур, 3 шт. тазовой жировой ткани (около 5 г, 2 г и 2 г, для задач 1, 2 и 3 оси 1, соответственно) будут отобраны, отправлены в центр биологических ресурсов и немедленно заморожены при -80°C. Исследователи выбирают висцеральный WAT вместо подкожного WAT, потому что висцеральные адипоциты более метаболически активны (8). Среди висцеральной ВАТ исследователи выбирают перивезикальную жировую ткань, поскольку жира вокруг мочевого пузыря всегда очень много, и его можно легко взять во время хирургической процедуры. Образцы простаты будут немедленно отправлены в патологоанатомические отделения и обработаны стандартизированным образом.

Пациентов, включенных в когорту, попросят подписать информированное согласие (после согласования с Этическим комитетом/IRB). Аннотированные биоресурсы, касающиеся предметов, включенных в программы, будут управляться в соответствии с правилами, определенными CNIL.

Отбор пациентов с агрессивным заболеванием или заболеванием с низким риском из когорты из 1000 пациентов, ожидаемых на M18, будут отобраны 100 пациентов с высокоагрессивным заболеванием. Отбор будет производиться на основе критериев высокого риска заболевания, в основном РПЖ высокой степени (оценка по шкале Глисона 8 или более) и/или патологической стадии pT3. Каждый из этих 100 пациентов затем будет сопоставлен (центр за центром) с 1 пациентом с вялотекущим заболеванием и идентичным возрастным статусом (50 лет или меньше, 51–55, 56–60, 61–65, 66–70, 71–75, старше 75 лет) и ИМТ (нормальный, избыточный вес и ожирение). Критерии вялотекущего заболевания будут включать предоперационный уровень ПСА < 10 нг/мл, 6 баллов по шкале Глисона или менее (на операционном образце) и стадию pT2. Если несколько индолентных случаев можно сопоставить с 1 агрессивным случаем, предпочтение будет отдаваться тому, у которого опухоль меньшего размера. Будет использована жировая ткань, взятая у этих 200 пациентов.

Цель состоит в том, чтобы выявить ассоциации между агрессивным и значительным РПЖ и составом жировой ткани. Исследователи предполагают, что стойкие органические загрязнители (отражающие кумулятивное прошлое воздействие) и/или липидный состав (отражающие прошлое потребление) вместе с экспрессией адипокинов могут быть связаны с агрессивностью заболевания. Будут приняты во внимание известные факторы агрессивности РПЖ (этническое происхождение, семейный анамнез и статус ожирения).

Задача 1: Анализ липидов Анализы, проводимые на образцах жировой ткани, будут следующими: i) состав триглицеридов и жирных кислот, и ii) относительные количества классов фосфолипидов мембраны жировых клеток. Можно разделить и количественно определить пять основных классов фосфолипидов, обнаруженных в плазматической мембране жировых клеток: фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилинозитол, фосфатидилсерин и сфингомиелин. Поскольку жировая ткань в основном состоит из триацилглицерина и только приблизительно 1% фосфолипидов, для изучения мембранных фосфолипидов потребуются большие количества образцов (5 г), чем обычно необходимо для анализа состава триглицеридов и жирных кислот (400-500 мг).

Образцы жировой ткани будут подвергаться экстракции липидов с использованием хлороформа и метанола (по методу Фолча). Вкратце, общий экстракт подвергают вакуумной сушке, затем повторно растворяют в смеси гексана и метанола для разделения нейтральных (растворимых в гексане) и полярных (растворимых в метаноле) липидов. Триглицериды в гексановой фазе будут дополнительно очищены от других нейтральных или полярных липидов с помощью тонкослойной хроматографии на пластинах с силикагелем. Очищенные триглицериды будут подвергаться переэтерификации метанола с получением летучих жирных кислот в виде метиловых эфиров. Разделение и количественное определение жирных кислот будет осуществляться с помощью газовой хроматографии (фазовая капиллярная колонка ВРХ-70, ввод на колонке, пламенно-ионизационный детектор).

Задача 2: Измерение адипокинов. Общая РНК из образцов жировой ткани будет извлечена с помощью метода Trizol, а качество РНК будет проверено с помощью электрофореза в агарозном геле и количественного определения с помощью NanoDrop. После обратной транскрипции кодирующей мРНК в кДНК контроль качества ПЦР-амплификации с обратной транскрипцией будет осуществляться с использованием гена домашнего хозяйства в небольшом количестве циклов и нового контроля с помощью гель-агарозы. Затем будет проведена количественная ПЦР в реальном времени в трех повторностях для девяти представляющих интерес генов (адипокины) и трех генов домашнего хозяйства для нормализации (18S, бета-актин и SDHA), т.е. будет получено 10 800 точек. ПЦР будет проводиться в 384-луночных планшетах, а реакционные смеси будут распределяться роботом. Список адипокинов (n = 9): хемерин, интерлейкин-6 (ИЛ-6), ингибитор активатора плазминогена-1 (PAI-1), связывание ретинола. белок 4 (RBP4), фактор некроза опухоли-альфа (ФНО-альфа), висфатин, лептин, адипонектин, апелин.

Задача 3: Измерение стойких органических загрязнителей (хлорорганических пестицидов) Аналитическая методология, используемая для измерения целевых хлорорганических пестицидов, основана на процедурах, ранее разработанных, проверенных и аккредитованных для других классов липофильных стойких органических загрязнителей, таких как диоксины и соединения ПХБ. Вкратце, за предварительной стадией с использованием ускоренной экстракции растворителем (ASE) будут следовать последовательные стадии очистки на колонках с активированным диоксидом кремния и целитом. Измерение будет проводиться с использованием газовой хроматографии в сочетании с высоким разрешением и/или тандемной масс-спектрометрией (ГХ-МСВР, ГХ-МС/МС). Количественное определение будет проводиться в соответствии с методом изотопного разбавления (т. е. с использованием 13С, помеченных аналогично, в качестве внутренних стандартов). Выбор основных целевых веществ будет предварительным на основе Стокгольмской конвенции, в которой перечислены около 12 основных пестицидов, вызывающих озабоченность.

Многоцентровая стандартизированная клинико-биологическая база данных позволит выделить 2 однородные группы пациентов с РПЖ с характеристиками либо агрессивного, либо потенциально вялотекущего заболевания. Исследователи ожидают, что анализ тазовой жировой ткани продемонстрирует, связаны ли некоторые категории 1/ липидов (отражающих диету), 2/ адипокинов и 3/ сохраненных ксенобиотиков с большим или меньшим риском агрессивности РПЖ. Такая идентификация может затем привести к превентивным стратегиям.