对牛奶过敏儿童的降压方法 (SDACMA)

60 名免疫球蛋白 E 介导的 CMA 儿童，在三级食物过敏中心连续观察，符合纳入标准的儿童将被邀请参加该研究。 将从每个婴儿的父母那里获得记忆、人口统计、人体测量和临床数据，以及关于社会人口因素、家庭和生活条件、父母过敏性疾病史、兄弟姐妹数量和宠物拥有量的信息，并记录在临床数据库。

然后对所有受试者进行 EHCF + LGG 的口服食物挑战。 只有经口食物挑战阴性的受试者才会被随机分配到两组饮食干预中的一组，为期 12 个月的随访期：第 1 组接受 AAF，第 2 组接受 EHCF + LGG。

在研究期间，营养师将评估该配方的有效使用，并就消除饮食期间可能出现的问题向父母提供咨询。 父母或看护人将被要求每天记录配方奶粉的使用情况。 准备的量（水的毫米数和配方奶勺的数量）和每次食用后剩余的量将记录在日记中，以评估孩子的食用量。

入学时，在6个月和12个月后，将通过入学时测量的体重、身长和头围来评估身体生长情况，在6个月和12个月后参照生长图表进行随访。 如有必要，将进行计划外访问。

此外，在入组时，6 个月和 12 个月后，研究人员将执行：

1. 所有口服食物挑战程序将在连续 2 天内以双盲方式进行。 全套应急设备和药物（肾上腺素、抗组胺药、类固醇）将在手边。 当出现临床症状或达到最高剂量时，将停止挑战。 孩子将被观察 2 小时，然后出院。
2. 皮肤点刺试验（全脂牛奶、酪蛋白、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白）：将过敏原和新鲜牛奶涂在患者前臂掌侧：牛奶（CM）含3.5%脂肪。 使用 1 毫米单峰柳叶刀（ALK，哥本哈根，丹麦）进行皮肤点刺试验，分别使用组胺二盐酸盐 (10 mg/ml) 和等渗盐水溶液 (NaCl 0.9%) 作为阳性和阴性对照。 将根据 15 分钟时风团和耀斑的最大直径（以毫米为单位）记录反应。 如果风团为 3 毫米或更大，而阴性对照没有反应，则 SPT 结果将被视为“阳性”。
3. 针对牛奶蛋白质和表位的总 IgE 和特异性 IgE 和免疫球蛋白 G 4：我们将进行静脉血样检测；患者的血清将使用管血清分离管收集并通过离心10-15分钟获得。 将血清快速冷冻并储存在 -80 °C 直至进一步分析。 从血清中，总 IgE 和特异性 IgE 和 IgG4 针对牛奶的蛋白质和表位将用酶免疫测定法进行分析。
4. 肠道微生物群组成：将收集粪便样本并立即冷冻至 -80°C 并储存直至进一步分析。 总基因组 DNA (gDNA) 将使用特定 DNA 从粪便材料中分离出来。 分离试剂盒和肠道微生物群组成将使用细菌方法和内部转录间隔区测序方法（高通量测序）进行分析。
5. 短链脂肪酸 (SCFA) 粪便和血清的产生：将收集粪便样本和血清。 称取 1 克粪便样本，在无菌磷酸盐缓冲盐溶液中按 1:2 稀释，并均质化。 然后通过离心（10000g，30 分钟，4°C）获得上清液，通过 0.2-μm 过滤器过滤并储存在 -80°C 直至分析。 患者的血清将使用管血清分离管收集并通过离心10-15分钟获得。 将血清快速冷冻并储存在 -80 °C 直至进一步分析。 将使用气相色谱-质谱法 (MS) 对 SCFA 进行分析，以测量粪便样本中乙酸、丙酸和丁酸的浓度。
6. 白细胞介素 (IL)-4、IL-5、IL-13、IL-10、干扰素 (IFN)-γ 的血清水平：我们将进行静脉血样检测；患者的血清将使用管血清分离管收集并通过离心10-15分钟获得。 血清将快速冷冻并储存在 -80 °C。 从血清中，IL-4、IL-5、IL-13、IL-10、IFN-γ 将通过 ELISA（每种细胞因子的特定试剂盒）测定。
7. 涉及 IgE 介导的过敏、IL-4、IL-5、IL-13、IL-10 和 IFN-γ 以及 FoxP3+ 的基因启动子区域的甲基化状态：将从患者中获取静脉血，并将提取 DNA使用 DNA 提取试剂盒从白细胞中提取。 根据制造商的说明，使用 Methylation Gold Kit (ZYMO Research Co.) 用亚硫酸氢钠修饰提取的 DNA。 转化后的 DNA 将储存在 -70°C 直至使用。 将使用高分辨率熔解实时（LightCycler® 480，Roche Applied Science）进行甲基化分析。 结果将通过直接测序确认（改进的 Sanger 方法：用四种不同荧光团标记的 ddNTP）。