Csökkentse a megközelítést tehéntej-allergiás gyermekeknél (SDACMA)

60 immunglobulin E által közvetített CMA gyermek, akiket egymást követően figyeltek meg a felsőfokú élelmiszer-allergiás központokban, és akik megfelelnek a felvételi kritériumoknak, meghívást kapnak a vizsgálatba. Az anamnesztikus, demográfiai, antropometriai és klinikai adatokat, valamint a szocio-demográfiai tényezőkre, a családi és életkörülményekre, a szülői allergiás betegségekre, a testvérek számára és az állattartásra vonatkozó információkat minden csecsemő szüleitől beszerezzük, és rögzítjük klinikai adatbázis.

Ezután minden tantárgyban szájon át EHCF + LGG-vel végzett táplálékkihívás történik. Csak azokat az alanyokat, akiknek negatív orális táplálékkiütésük van, véletlenszerűen besorolják az étrendi beavatkozások két csoportja egyikébe egy 12 hónapos követési időszakra: az 1. csoport AAF-t, a 2. csoport pedig EHCF + LGG-t kapott.

A tápszer hatékony használatát a vizsgálat során dietetikusok fogják értékelni, akik tanácsot adnak a szülőknek az eliminációs diéta során felmerülő problémákról. A szülőket vagy gondozókat arra kérik, hogy napi nyilvántartást vezessenek a tápszerhasználatról. Az elkészített mennyiséget (vízmilliméter és tápszeres kanalak száma) és az egyes fogyasztások után visszamaradt mennyiséget egy naplóban rögzítjük a gyermek által elfogyasztott mennyiség értékeléséhez.

A beiratkozáskor 6 és 12 hónap után a testnövekedést a beiratkozáskor mért testtömeg, testhossz és fejkörfogat alapján, majd 6 és 12 hónapos követés után a növekedési diagramokra hivatkozva értékeljük. Szükség esetén előre nem tervezett látogatásokra kerül sor.

Ezen túlmenően a beiratkozáskor, 6 és 12 hónap elteltével, a vizsgálók elvégzik:

1. Minden orális táplálékkihívási eljárást kettős vak módszerrel hajtanak végre 2 egymást követő napon. A teljes sürgősségi felszerelés és gyógyszerek (epinefrin, antihisztaminok, szteroidok) kéznél lesznek. A kihívást a klinikai tünetek megjelenésekor vagy a legmagasabb dózis elérésekor leállítják. A gyermeket 2 órán keresztül megfigyelik, majd elbocsátják.
2. Bőrteszt (teljes tej, kazein, α-laktalbumin, β-laktoglobulin): allergéneket és friss tejet alkalmazunk a páciensnek voláris alkar: 3,5% zsírtartalmú tehéntej (CM). A bőrszúrási teszteket 1 mm-es single-peak lándzsával (ALK, Koppenhága, Dánia) végeztük, hisztamin-dihidroklorid (10 mg/ml) és izotóniás sóoldat (NaCl 0,9%) pozitív és negatív kontrollként. A reakciókat a búza legnagyobb átmérője (milliméterben) alapján rögzítjük és 15 percnél a fellángolást. Az SPT eredmény "pozitívnak" minősül, ha a búza 3 mm-es vagy nagyobb volt, a negatív kontroll reakciója nélkül.
3. Teljes IgE és specifikus IgE és Immunglobulin G 4 a tehéntej fehérjéi és epitópjai ellen: vénás vérmintát végzünk; A betegek szérumát csőszérumleválasztó csövek segítségével gyűjtik össze, és 10-15 perces centrifugálással nyerték ki. A szérumot gyorsfagyasztják és -80 °C-on tárolják a további elemzésig. A szérumból az össz-IgE-t, valamint a tehéntej fehérjéivel és epitópjaival szembeni specifikus IgE-t és IgG4-et enzimatikus immunológiai vizsgálattal elemzik.
4. A bélmikrobióta összetétele: székletmintát veszünk, és azonnal lefagyasztjuk -80 °C-ra, és további elemzésig tároljuk. A teljes genomiális DNS-t (gDNS) egy specifikus DNS segítségével izolálják a székletből. Az izolációs készletet és a bélmikrobióta összetételét a baktériumokra vonatkozó megközelítés és a belső átírt spacer régió szekvenálási megközelítése (nagy áteresztőképességű szekvenálás) segítségével elemzik.
5. Rövid szénláncú zsírsavak (SCFA) széklet- és szérumtermelés: székletmintát és szérumot vesznek. Egy gramm székletmintát lemérünk, 1:2 arányban hígítunk steril foszfáttal pufferolt sóoldattal, és homogenizáljuk. A felülúszókat ezután centrifugálással (10 000 g, 30 perc, 4 °C) nyerjük ki, 0,2 μm-es szűrőkön szűrjük, és -80 °C-on tároljuk az elemzésig. A betegek szérumát csőszérumleválasztó csövek segítségével gyűjtik össze, és 10-15 perces centrifugálással nyerték ki. A szérumot gyorsfagyasztják és -80 °C-on tárolják a további elemzésig. Az SCFA-k elemzését gázkromatográfiás-tömegspektrometriával (MS) végzik az ecetsav, propionsav és vajsav koncentrációjának mérésére a székletmintákban.
6. Interleukin (IL)-4, IL-5, IL-13, IL-10, interferon (IFN)-γ szérum szintje: vénás vérmintát végzünk; A betegek szérumát csőszérumleválasztó csövek segítségével gyűjtik össze, és 10-15 perces centrifugálással nyerték ki. A szérumot gyorsfagyasztják és -80 °C-on tárolják. A szérumból az IL-4, IL-5, IL-13, IL-10, az IFN-y meghatározása ELISA-val történik (specifikus kit minden citokinhez).
7. Az IgE által közvetített allergiában érintett gének, az IL-4, IL-5, IL-13, IL-10 és IFN-γ, valamint a FoxP3+ promóter régiójának metilációs státusza: Vénás vért vesznek a betegektől és DNS-t leukocitákból DNS Extraction Kit segítségével extraháljuk. Az extrahált DNS-t nátrium-hidrogén-szulfittal módosítjuk a Methylation Gold Kit (ZYMO Research Co.) segítségével a gyártó utasításai szerint. Az átalakított DNS-t felhasználásig -70 °C-on tároljuk. A metilezési elemzéseket nagy felbontású, valós idejű olvasztási módszerrel (LightCycler® 480, Roche Applied Science) végezzük. Az eredményeket közvetlen szekvenálás (Sanger-módszer módosított: négy különböző fluoroforral jelölt ddNTP-k) igazolja.