Step-down-Ansatz bei Kindern mit Kuhmilchallergie (SDACMA)

60 Immunglobulin-E-vermittelte CMA-Kinder, die nacheinander in tertiären Zentren für Nahrungsmittelallergie beobachtet wurden und die Einschlusskriterien erfüllen, werden zur Teilnahme an der Studie eingeladen. Anamnestische, demografische, anthropometrische und klinische Daten sowie Informationen zu soziodemografischen Faktoren, Familien- und Lebensumständen, Allergieerkrankungen der Eltern, Anzahl der Geschwister und Haustierhaltung werden von den Eltern jedes Säuglings erhoben und in a erfasst klinische Datenbank.

Dann wird bei allen Probanden eine orale Nahrungsmittelprovokation mit EHCF + LGG durchgeführt. Nur Probanden mit negativer oraler Nahrungsmittelprovokation werden zufällig einer der beiden Gruppen von diätetischen Interventionen für einen 12-monatigen Nachbeobachtungszeitraum zugeteilt: Gruppe 1 erhielt AAF und Gruppe 2 erhielt EHCF + LGG.

Die effektive Anwendung der Formel wird während der Studie von Ernährungsberatern bewertet, die die Eltern über Probleme beraten, die während der Eliminationsdiät auftreten könnten. Eltern oder Betreuer werden gebeten, täglich Aufzeichnungen über die Verwendung der Formel zu führen. Die zubereitete Menge (Millimeter Wasser und Anzahl der Formellöffel) und die nach jedem Verzehr verbleibende Menge werden in einem Tagebuch festgehalten, um die vom Kind verzehrte Menge zu beurteilen.

Bei der Einschreibung, nach 6 und 12 Monaten wird das Körperwachstum anhand von Körpergewicht, Körperlänge und Kopfumfang gemessen bei der Einschreibung, nach 6 und 12 Monaten Nachbeobachtung anhand von Wachstumsdiagrammen beurteilt. Bei Bedarf werden außerplanmäßige Besuche durchgeführt.

Zusätzlich führen die Ermittler bei der Einschreibung nach 6 und 12 Monaten Folgendes durch:

1. Alle Provokationsverfahren mit oraler Nahrungsaufnahme werden an 2 aufeinanderfolgenden Tagen doppelblind durchgeführt. Vollständige Notfallausrüstung und Medikamente (Epinephrin, Antihistaminika, Steroide) werden zur Hand sein. Die Provokation wird beendet, sobald klinische Symptome auftreten oder die Höchstdosis erreicht ist. Das Kind wird 2 h beobachtet und dann entlassen.
2. Haut-Prick-Test (Vollmilch, Casein, α-Lactalbumin, β-Lactoglobulin): Allergene und frische Milch werden auf den volaren Unterarm des Patienten aufgetragen: Kuhmilch (CM) mit 3,5 % Fett. Haut-Prick-Tests wurden unter Verwendung einer 1-mm-Einfachspitzen-Lanzette (ALK, Kopenhagen, Dänemark) mit Histamindihydrochlorid (10 mg/ml) und isotonischer Kochsalzlösung (NaCl 0,9 %) als Positiv- bzw. Negativkontrolle durchgeführt. Die Reaktionen werden auf der Grundlage des größten Durchmessers (in Millimetern) der Quaddel und des Aufflackerns nach 15 Minuten aufgezeichnet. Das SPT-Ergebnis gilt als „positiv“, wenn die Quaddel 3 mm oder größer war, ohne Reaktion der Negativkontrolle.
3. Gesamt-IgE und spezifisches IgE und Immunglobulin G 4 gegen Proteine ​​und Epitope der Kuhmilch: wir führen eine venöse Blutentnahme durch; Das Serum der Patienten wird unter Verwendung von Röhrchenserum-Trennröhrchen gesammelt und wurde durch Zentrifugation für 10–15 Minuten erhalten. Das Serum wird schockgefroren und bis zur weiteren Analyse bei -80 °C gelagert. Aus dem Serum werden Gesamt-IgE und spezifisches IgE und IgG4 gegen Proteine ​​und Epitope der Kuhmilch mit einem enzymatischen Immunoassay analysiert.
4. Zusammensetzung der Darmmikrobiota: Eine Stuhlprobe wird entnommen und sofort auf -80 °C eingefroren und bis zur weiteren Analyse gelagert. Die gesamte genomische DNA (gDNA) wird aus Fäkalmaterial unter Verwendung einer spezifischen DNA isoliert. Das Isolationskit und die Zusammensetzung der Darmmikrobiota werden mit einem Ansatz für Bakterien und einem internen transkribierten Spacer-Region-Sequenzierungsansatz (Hochdurchsatz-Sequenzierung) analysiert.
5. Produktion von kurzkettigen Fettsäuren (SCFAs) im Stuhl und im Serum: Es werden eine Stuhlprobe und ein Serum entnommen. Ein Gramm Kotproben werden gewogen, 1:2 in steriler phosphatgepufferter Kochsalzlösung verdünnt und homogenisiert. Die Überstände werden dann durch Zentrifugation (10.000 g, 30 Minuten, 4 °C) gewonnen, durch 0,2-μm-Filter filtriert und bis zur Analyse bei –80 °C gelagert. Das Serum der Patienten wird unter Verwendung von Röhrchenserumtrennröhrchen gesammelt und wurde durch Zentrifugation für 10–15 Minuten erhalten. Das Serum wird schockgefroren und bis zur weiteren Analyse bei -80 °C gelagert. Die Analyse von SCFAs wird mittels Gaschromatographie-Massenspektrometrie (MS) durchgeführt, um die Konzentrationen von Essig-, Propion- und Buttersäure in Stuhlproben zu messen.
6. Serumspiegel von Interleukin (IL)-4, IL-5, IL-13, IL-10, Interferon (IFN)-γ: wir führen eine venöse Blutentnahme durch; Das Serum der Patienten wird unter Verwendung von Röhrchenserum-Trennröhrchen gesammelt und wurde durch Zentrifugation für 10–15 Minuten erhalten. Das Serum wird schockgefroren und bei -80 °C gelagert. Aus Serum werden IL-4, IL-5, IL-13, IL-10, IFN-γ durch ELISA (spezifisches Kit für jedes Zytokin) bestimmt.
7. Methylierungsstatus der Promotorregion von Genen, die an der IgE-vermittelten Allergie beteiligt sind, IL-4, IL-5, IL-13, IL-10 und IFN-γ und von FoxP3+: Den Patienten wird venöses Blut und DNA entnommen extrahiert aus Leukozyten unter Verwendung des DNA-Extraktionskits. Extrahierte DNA wird mit Natriumbisulfit unter Verwendung des Methylation Gold Kit (ZYMO Research Co.) gemäß den Anweisungen des Herstellers modifiziert. Die umgewandelte DNA wird bis zur Verwendung bei -70 °C gelagert. Methylierungsanalysen werden unter Verwendung von High Resolution Melting Real Time (LightCycler® 480, Roche Applied Science) durchgeführt. Die Ergebnisse werden durch direkte Sequenzierung bestätigt (Sanger-Methode modifiziert: ddNTPs markiert mit vier verschiedenen Fluorophoren).