Approche dégressive chez les enfants allergiques au lait de vache (SDACMA)

60 enfants CMA médiés par l'immunoglobuline E, observés consécutivement dans des centres tertiaires pour les allergies alimentaires, qui répondront aux critères d'inclusion seront invités à participer à l'étude. Des données anamnestiques, démographiques, anthropométriques et cliniques, ainsi que des informations sur les facteurs socio-démographiques, les conditions familiales et de vie, les antécédents parentaux de maladies allergiques, le nombre de frères et sœurs et la possession d'animaux domestiques seront obtenues auprès des parents de chaque enfant et enregistrées dans un base de données cliniques.

Ensuite, chez tous les sujets, un challenge alimentaire oral avec EHCF + LGG sera réalisé. Seuls les sujets présentant une provocation alimentaire orale négative seront répartis au hasard dans l'un des deux groupes d'interventions diététiques pendant une période de suivi de 12 mois : le groupe 1 a reçu AAF et le groupe 2 a reçu EHCF + LGG.

L'utilisation efficace de la formule sera évaluée au cours de l'étude par des diététiciens conseillant les parents sur les problèmes qui pourraient survenir pendant le régime d'élimination. Les parents ou les soignants seront invités à tenir un registre quotidien de l'utilisation du lait maternisé. La quantité préparée (millimètres d'eau et nombre de cuillères de lait maternisé) et la quantité restante après chaque consommation seront consignées dans un journal pour évaluer la quantité consommée par l'enfant.

A l'inscription, après 6 et 12 mois, la croissance corporelle sera évaluée par le poids corporel, la longueur corporelle et le tour de tête mesurés à l'inscription, après 6 et 12 mois de suivi en référence aux courbes de croissance. Des visites inopinées seront effectuées si nécessaire.

De plus à l'inscription, après 6 et 12 mois, les investigateurs effectueront :

1. Toutes les procédures de provocation alimentaire orale seront effectuées en double aveugle sur 2 jours consécutifs. L'équipement d'urgence complet et les médicaments (épinéphrine, antihistaminiques, stéroïdes) seront à portée de main. Le challenge sera arrêté dès l'apparition des symptômes cliniques ou lorsque la dose la plus élevée sera atteinte. L'enfant sera observé pendant 2 h, puis renvoyé.
2. Prick test cutané (lait entier, caséine, α-lactalbumine, β-lactoglobuline) : des allergènes et du lait frais seront appliqués sur l'avant-bras palmaire du patient : lait de vache (MC) contenant 3,5 % de matières grasses. Des tests cutanés ont été effectués à l'aide d'une lancette à pointe unique de 1 mm (ALK, Copenhague, Danemark), avec du dichlorhydrate d'histamine (10 mg/ml) et une solution saline isotonique (NaCl 0,9 %) comme contrôle positif et négatif, respectivement. Les réactions seront enregistrées sur la base du plus grand diamètre (en millimètres) de la papule et de l'évasement à 15 min. Le résultat SPT sera considéré comme "positif" si la papule était de 3 mm ou plus, sans réaction du contrôle négatif.
3. IgE totales et IgE spécifiques et Immunoglobuline G 4 contre les protéines et les épitopes du lait de vache : nous réaliserons un prélèvement de sang veineux ; le sérum des patients sera recueilli à l'aide de tubes séparateurs de sérum et a été obtenu par centrifugation pendant 10 à 15 minutes. Le sérum sera congelé et stocké à -80 °C jusqu'à une analyse plus approfondie. A partir du sérum, les IgE totales et les IgE et IgG4 spécifiques contre les protéines et les épitopes du lait de vache seront analysées par dosage immunoenzymatique.
4. Composition du microbiote intestinal : un échantillon de selles sera prélevé et immédiatement congelé à -80 °C et stocké jusqu'à une analyse plus approfondie. L'ADN génomique total (ADNg) sera isolé des matières fécales à l'aide d'un ADN spécifique. Le kit d'isolement et la composition du microbiote intestinal seront analysés à l'aide d'une approche pour les bactéries et d'une approche de séquençage de la région d'espacement interne transcrite (séquençage à haut débit).
5. Production fécale et sérique d'acides gras à chaîne courte (AGCC) : un échantillon de selles et du sérum seront prélevés. Un gramme d'échantillons fécaux sera pesé, dilué 1:2 dans une solution saline stérile tamponnée au phosphate et homogénéisé. Les surnageants seront ensuite obtenus par centrifugation (10 000g, 30 minutes, 4°C), filtrés sur des filtres de 0,2 μm et conservés à -80°C jusqu'à analyse. Le sérum des patients sera recueilli à l'aide de tubes séparateurs de sérum et a été obtenu par centrifugation pendant 10 à 15 minutes. Le sérum sera congelé et stocké à -80 °C jusqu'à une analyse plus approfondie. L'analyse des SCFA sera effectuée à l'aide de la chromatographie en phase gazeuse et de la spectrométrie de masse (MS) pour mesurer les concentrations d'acide acétique, propionique et butyrique dans les échantillons fécaux.
6. Niveau sérique d'interleukine (IL)-4, IL-5, IL-13, IL-10, interféron (IFN)-γ : nous effectuerons un prélèvement de sang veineux ; le sérum des patients sera recueilli à l'aide de tubes séparateurs de sérum et a été obtenu par centrifugation pendant 10 à 15 minutes. Le sérum sera congelé et stocké à -80 °C. A partir du sérum, IL-4, IL-5, IL-13, IL-10, IFN-γ seront dosés par ELISA (kit spécifique pour chaque cytokine).
7. Statut de méthylation de la région promotrice des gènes impliqués dans l'allergie médiée par les IgE, IL-4, IL-5, IL-13, IL-10 et IFN-γ et de FoxP3+ : du sang veineux sera prélevé sur les patients et l'ADN sera extrait des leucocytes à l'aide du kit d'extraction d'ADN. L'ADN extrait sera modifié avec du bisulfite de sodium à l'aide du kit Methylation Gold (ZYMO Research Co.) conformément aux instructions du fabricant. L'ADN converti sera stocké à -70°C jusqu'à son utilisation. Les analyses de méthylation seront effectuées à l'aide de la fusion en temps réel à haute résolution (LightCycler® 480, Roche Applied Science). Les résultats seront confirmés par séquençage direct (méthode de Sanger modifiée : ddNTP marqués avec quatre fluorophores différents).