Steg ner tillvägagångssätt hos barn med komjölksallergi (SDACMA)

60 immunglobulin E-medierade CMA-barn, observerade i följd vid tertiära Centers for Food Allergy, som kommer att uppfylla inklusionskriterierna kommer att bjudas in att delta i studien. Anamnestiska, demografiska, antropometriska och kliniska data, såväl som information om sociodemografiska faktorer, familje- och levnadsförhållanden, föräldrarnas historia av allergiska sjukdomar, antal syskon och husdjursägande kommer att erhållas från föräldrarna till varje spädbarn och registreras i en klinisk databas.

Sedan kommer en oral matutmaning med EHCF + LGG att utföras i alla ämnen. Endast försökspersoner med negativ oral födotest kommer att slumpmässigt fördelas till en av de två grupperna av kostinterventioner under en 12 månaders uppföljningsperiod: grupp 1 fick AAF och grupp 2 fick EHCF + LGG.

Effektiv användning av formeln kommer att utvärderas under studien av dietister som ger föräldrar råd om problem som kan uppstå under elimineringsdieten. Föräldrar eller vårdgivare kommer att uppmanas att föra ett dagligt register över formelanvändning. Mängden beredd (millimeter vatten och antal formlerskedar) och mängden kvar efter varje konsumtion kommer att registreras i en dagbok för att bedöma mängden som konsumerats av barnet.

Vid inskrivningen, efter 6 och 12 månader kommer kroppstillväxten att bedömas av kroppsvikt, kroppslängd och huvudomkrets mätt vid inskrivningen, efter 6 och 12 månaders uppföljning med hänvisning till tillväxtdiagram. Oschemalagda besök kommer att göras vid behov.

Vid registreringen, efter 6 och 12 månader, kommer utredarna att utföra:

1. Alla orala matutmaningsprocedurer kommer att utföras dubbelblindt under 2 på varandra följande dagar. Full nödutrustning och droger (epinefrin, antihistaminer, steroider) kommer att finnas till hands. Utmaningen kommer att avbrytas vid uppkomsten av kliniska symtom eller när den högsta dosen uppnås. Barnet kommer att observeras i 2 timmar och sedan släppas ut.
2. Hudstickstest (helmjölk, kasein, α-laktalbumin, β-laktoglobulin): allergener och färsk mjölk kommer att appliceras på patientens volar underarm: komjölk (CM) som innehåller 3,5 % fett. Hudstickstest utfördes med användning av en 1 mm enkel topplansett (ALK, Köpenhamn, Danmark), med histamin-dihydroklorid (10 mg/ml) och isoton saltlösning (NaCl 0,9%) som positiv respektive negativ kontroll. Reaktioner kommer att registreras på basis av den största diametern (i millimeter) av sädet och blossar efter 15 min. SPT-resultatet kommer att betraktas som "positivt" om valvet var 3 mm eller större, utan reaktion från den negativa kontrollen.
3. Totalt IgE och specifikt IgE och Immunoglobulin G 4 mot proteiner och epitoper av komjölk: vi kommer att utföra ett venöst blodprov; serum från patienterna kommer att samlas upp med hjälp av rörserumseparatorrör och erhölls genom centrifugering under 10-15 minuter. Serum kommer att snabbfrysas och förvaras vid -80 °C tills vidare analys. Från serum kommer totalt IgE och specifikt IgE och IgG4 mot proteiner och epitoper av komjölk att analyseras med enzymatisk immunanalys.
4. Tarmmikrobiotasammansättning: ett avföringsprov kommer att samlas in och omedelbart frysas till -80°C och förvaras tills vidare analys. Totalt genomiskt DNA (gDNA) kommer att isoleras från fekalt material med användning av ett specifikt DNA. Isoleringssats och tarmmikrobiota kommer att analyseras med hjälp av en metod för bakterier och en intern transkriberad spacer region sekvensering (High-throughput sekvensering).
5. Kortkedjiga fettsyror (SCFA) fekal och serumproduktion: ett avföringsprov och serum kommer att samlas in. Ett gram avföringsprover vägs, späds 1:2 i steril fosfatbuffrad koksaltlösning och homogeniseras. Supernatanter kommer sedan att erhållas genom centrifugering (10 000 g, 30 minuter, 4 °C), filtreras genom 0,2 μm filter och förvaras vid -80 °C fram till analys. Serum från patienterna kommer att samlas upp med hjälp av rörserumseparatorrör och erhölls genom centrifugering i 10-15 minuter. Serum kommer att snabbfrysas och förvaras vid -80 °C tills vidare analys. Analys av SCFA kommer att utföras med hjälp av gaskromatografi-masspektrometri (MS) för att mäta koncentrationerna av ättiksyra, propionsyra och smörsyra i fekala prover.
6. Serumnivå av interleukin (IL)-4, IL-5, IL-13, IL-10, interferon (IFN)-y: vi kommer att utföra ett venöst blodprov; serum från patienterna kommer att samlas upp med hjälp av rörserumseparatorrör och erhölls genom centrifugering under 10-15 minuter. Serum kommer att snabbfrysas och förvaras vid -80 °C. Från serum kommer IL-4, IL-5, IL-13, IL-10, IFN-y att bestämmas med ELISA (specifikt kit för varje cytokin).
7. Metyleringsstatus för promotorregionen för gener involverade i IgE-medierad allergi, IL-4, IL-5, IL-13, IL-10 och IFN-y och för FoxP3+: Venöst blod kommer att erhållas från patienterna och DNA kommer att tas extraheras från leukocyter med hjälp av DNA Extraction Kit. Extraherat DNA kommer att modifieras med natriumbisulfit med hjälp av Methylation Gold Kit (ZYMO Research Co.) enligt tillverkarens instruktioner. Det omvandlade DNA:t kommer att lagras vid -70°C tills det används. Metyleringsanalyser kommer att utföras med hjälp av högupplöst smältning i realtid (LightCycler® 480, Roche Applied Science). Resultaten kommer att bekräftas genom direkt sekvensering (Sanger-metoden modifierad: ddNTPs märkta med fyra olika fluoroforer).