젖소 알레르기가 있는 어린이의 단계적 접근 (SDACMA)

60명의 면역글로불린 E-매개 CMA 어린이는 3차 식품 알레르기 센터에서 연속적으로 관찰되었으며 포함 기준을 충족할 것이며 연구에 참여하도록 초대될 것입니다. 기억 상실, 인구 통계, 인체 측정 및 임상 데이터뿐만 아니라 사회 인구 학적 요인, 가족 및 생활 조건, 알레르기 질환의 부모 병력, 형제 수 및 애완 동물 소유에 대한 정보는 각 유아의 부모로부터 얻어지고 기록됩니다. 임상 데이터베이스.

그런 다음 모든 과목에서 EHCF + LGG를 사용한 구강 음식 도전이 수행됩니다. 구강 음식 시도가 음성인 피험자만 12개월 추적 기간 동안 식이 개입의 두 그룹 중 하나에 무작위로 할당됩니다. 그룹 1은 AAF를, 그룹 2는 EHCF + LGG를 받았습니다.

공식의 효과적인 사용은 제거 다이어트 중에 발생할 수 있는 문제에 대해 부모와 상담하는 영양사가 연구 중에 평가할 것입니다. 부모나 보호자는 분유 사용에 대한 일일 기록을 유지해야 합니다. 준비된 양(밀리미터의 물과 분유 숟가락의 수)과 각 소비 후 남은 양은 어린이가 소비하는 양을 평가하기 위해 일기에 기록됩니다.

등록 시 6개월 및 12개월 후 신체 성장은 성장 차트를 참조하여 6개월 및 12개월 추적 후 등록 시 측정한 체중, 몸 길이 및 머리 둘레로 평가됩니다. 필요한 경우 예정되지 않은 방문이 이루어집니다.

또한 등록 시 6개월 및 12개월 후 조사관은 다음을 수행합니다.

1. 모든 구강 음식 챌린지 절차는 연속 2일 동안 이중 맹검 방식으로 수행됩니다. 완전한 응급 장비와 약물(에피네프린, 항히스타민제, 스테로이드)이 준비되어 있습니다. 챌린지는 임상 증상이 나타나거나 최고 용량에 도달하면 중지됩니다. 아이는 2시간 동안 관찰한 후 퇴원합니다.
2. 피부 찌름 테스트(전유, 카제인, α-락트알부민, β-락토글로불린): 알레르겐과 신선한 우유를 환자의 팔뚝에 바릅니다: 3.5% 지방을 함유한 젖소(CM). 피부 찌름 테스트는 히스타민 디히드로클로라이드(10 mg/ml) 및 등장 식염수(NaCl 0.9%)를 각각 양성 및 음성 대조군으로 하여 1 mm 단일 피크 란셋(ALK, 덴마크 코펜하겐)을 사용하여 수행하였다. 반응은 15분에 팽진 및 발적의 가장 큰 직경(밀리미터 단위)을 기준으로 기록됩니다. 음성 대조군의 반응 없이 팽진이 3mm 이상인 경우 SPT 결과는 "양성"으로 간주됩니다.
3. 우유의 단백질 및 에피토프에 대한 총 IgE 및 특정 IgE 및 면역글로불린 G 4: 정맥혈 샘플을 수행합니다. 환자의 혈청은 튜브 혈청 분리기 튜브를 사용하여 수집하고 10-15분 동안 원심분리하여 얻었다. 혈청은 급속 동결되어 추가 분석이 있을 때까지 -80°C에서 보관됩니다. 혈청에서 젖소의 단백질과 에피토프에 대한 총 IgE와 특정 IgE 및 IgG4를 효소 면역분석법으로 분석합니다.
4. 장내 미생물군 구성: 대변 샘플을 수집하여 즉시 -80°C로 냉동하고 추가 분석까지 보관합니다. 전체 게놈 DNA(gDNA)는 특정 DNA를 사용하여 분변 물질에서 분리됩니다. 분리 키트 및 장내 미생물 구성은 박테리아에 대한 접근법과 내부 전사된 스페이서 영역 시퀀싱 접근법(High-throughput sequencing)을 사용하여 분석됩니다.
5. 단쇄 지방산(SCFA) 대변 및 혈청 생산: 대변 샘플 및 혈청을 수집합니다. 대변 ​​샘플 1g의 무게를 측정하고 멸균 인산염 완충 식염수에 1:2로 희석한 다음 균질화합니다. 그런 다음 상청액을 원심분리(10,000g, 30분, 4°C)로 얻고, 0.2-μm 필터를 통해 여과하고 분석할 때까지 -80°C에서 보관합니다. 튜브 혈청 분리기 튜브를 사용하여 환자의 혈청을 수집하고 10-15분 동안 원심분리하여 얻었다. 혈청은 급속 동결되어 추가 분석이 있을 때까지 -80°C에서 보관됩니다. SCFA 분석은 배설물 샘플에서 아세트산, 프로피온산 및 부티르산의 농도를 측정하기 위해 가스 크로마토그래피-질량 분석법(MS)을 사용하여 수행됩니다.
6. 인터루킨(IL)-4, IL-5, IL-13, IL-10, 인터페론(IFN)-γ의 혈청 수준: 정맥혈 샘플을 수행합니다. 환자의 혈청은 튜브 혈청 분리기 튜브를 사용하여 수집하고 10-15분 동안 원심분리하여 얻었다. 혈청은 급속 냉동되어 -80°C에서 보관됩니다. 혈청에서 IL-4, IL-5, IL-13, IL-10, IFN-γ는 ELISA(각 사이토카인에 대한 특정 키트)에 의해 결정됩니다.
7. IgE 매개 알레르기, IL-4, IL-5, IL-13, IL-10, IFN-γ 및 FoxP3+ 관련 유전자의 프로모터 영역 메틸화 상태: 정맥혈을 환자로부터 채취하고 DNA를 DNA Extraction Kit를 이용하여 백혈구에서 추출한 추출된 DNA는 제조업체의 지침에 따라 Methylation Gold Kit(ZYMO Research Co.)를 사용하여 아황산수소나트륨으로 변형됩니다. 변환된 DNA는 사용할 때까지 -70°C에서 보관됩니다. 메틸화 분석은 고해상도 용융 실시간(LightCycler® 480, Roche Applied Science)을 사용하여 수행됩니다. 결과는 직접 시퀀싱(변형된 Sanger 방법: 4개의 상이한 형광단으로 표지된 ddNTP)에 의해 확인될 것입니다.