经皮耳迷走神经刺激的急性心血管效应

在研究开始前，将使用在线随机序列生成器（网址：www.randomizer.org）为全部20名参与者生成完整的随机化序列。 一位不参与参与者招募、筛选、数据收集或结果评估的独立研究人员将使用“随机化列表”功能，生成20种不同的三种实验条件（主动taVNS、假声音和亚阈值假刺激）的随机顺序。 每位参与者将被分配一个从1到20的顺序识别号，并对应一个随机序列，决定他们在第2、3、4次访视中接受哪种条件。

独立研究人员将在安全的、受密码保护的电子文件或上锁的实体文件中保存主随机化列表，仅供其本人访问。 这确保了在整个招募和入组过程中分配隐藏。 在每次实验会话（第2、3、4次访视）的早晨，独立研究人员将通过安全电子邮件、电话或当面方式，向负责设置和操作taVNS设备的研究协调员传达该特定参与者和访视的分配条件。 此沟通仅指定当天要实施的条件（例如，“参与者15，第2次访视：主动taVNS”）。

接收此信息并准备设备的研究协调员将不参与结果评估。 重要的是，研究中有两名关键人员将全程保持盲态：参与者（他们不会被告知在任何给定日期接受哪种类型的刺激）和结果评估员（执行所有心血管测量）。 随机化列表将保存在安全的研究文件中，只有在所有数据收集和初步分析完成后，才会向研究团队完全公开。

盲法程序

本研究采用三重盲法以最小化偏倚。 参与者将在整个研究过程中对条件分配保持盲态。 他们将被告知该研究正在比较不同强度或模式的迷走神经刺激，但不会被告知哪些会话涉及主动刺激与假刺激。

假条件的设计，特别是假声音电极（产生模仿主动刺激的触觉和听觉提示），有助于实现有效的参与者盲法。 亚阈值假条件明确说明刺激低于感觉阈值，在不影响盲法的情况下保持程序的可靠性。 结果评估员也将保持盲态。 具体而言，在整个研究过程中执行所有心血管测量的研究者将保持盲态，不知道参与者在每次会话中接受哪种条件。 数据分析员在统计分析期间将保持盲态，条件分配以数字编码。 分配代码将由主要研究者安全保管，只有在所有分析完成后才会向统计分析员公开。

对参与表示兴趣的个人将被邀请到诺森比亚大学心血管生理学实验室进行初步筛选访视。 到达后，研究团队将与潜在参与者一起审查参与者信息表，详细解释所有研究程序，并回答任何问题。 将提供足够的时间让个人考虑参与，之后在任何研究程序开始前获得书面知情同意。

在同意后，参与者将接受结构化访谈，收集人口统计信息，包括年龄、性别和种族，以及详细健康史，涵盖心血管、神经和精神疾病。 将记录当前药物使用情况，包括处方药、非处方药和膳食补充剂。 将评估生活方式因素，包括习惯性身体活动水平、饮食模式、吸烟状况、饮酒量、睡眠质量和感知压力。

将按照标准化程序进行人体测量。 身高将使用壁挂式身高计测量至最近0.1厘米，参与者赤脚站立。 体重将使用校准的数字秤测量至最近0.1千克，参与者穿着轻便衣物且不穿鞋。 身体质量指数将计算为质量（千克）除以身高（米）的平方。 腰围将在下肋缘和髂嵴之间的最窄点测量。 臀围将在臀部最宽点测量。 颈围将在喉结下方的颈部中点测量。 所有围度测量将使用无弹性卷尺测量至最近0.1厘米。

诊室血压将根据现行指南，使用校准的水银血压计和听诊器通过听诊方法评估。

参与者将在安静的房间中坐姿，背部有支撑，双脚平放地面，手臂支撑在心脏水平。 在安静休息五分钟后，将从每只手臂以一分钟间隔测量三次血压读数。 Korotkoff音第I相用于识别收缩压，第V相用于识别舒张压。 将计算所有六个读数的平均值以确定资格。 平均收缩压低于140毫米汞柱且舒张压低于90毫米汞柱的参与者将符合血压纳入标准。

熟悉taVNS程序

完成筛选评估后，符合所有纳入标准且无排除标准的参与者将接受一个熟悉会话，以介绍taVNS设备和程序。 研究团队将解释经皮耳廓迷走神经刺激的机制，并演示Parasym设备和电极放置。 参与者随后将有机会亲身体验刺激。 电极将放置在左耳屏，并指导参与者从零开始逐渐增加刺激强度，直到感知到持续的刺痛感。 他们将被告知，在实际实验会话中，强度将设置在其不适阈值以下一毫安。

此熟悉会话有多个目的：确保参与者了解实验会话期间的预期，让他们体验感觉并确认他们愿意继续，提供机会识别可能无法耐受刺激的个体，并减少实验会话期间的焦虑和新奇效应。

将鼓励参与者提问并表达任何担忧。 只有对刺激感到舒适并愿意继续的参与者才会被纳入研究，并安排三次实验会话。

实验会话（第2、3、4次访视）

会话前要求和标准化

为了控制已知影响心血管和自主神经功能的因素，参与者将在每次实验会话前收到详细的标准化说明。 他们将被告知至少在预定会话时间前两小时仅进食清淡餐食，并在会话前至少12小时内避免所有含咖啡因产品，包括咖啡、茶、含咖啡因软饮料、能量饮料和巧克力。 每次会话前24小时内禁止饮酒。

参与者将被要求在每次会话前48小时内避免剧烈体育活动或结构化锻炼，但允许轻度活动如散步。 吸烟者将被要求在会话前至少三小时内不吸烟。 将鼓励他们在每次会话前一晚获得至少七小时的睡眠，并保持正常水分水平，同时避免在到达实验室前立即摄入过多液体。

所有实验会话将为每位参与者在一天中的同一时间安排，从上午9:00至10:00开始，以控制心血管参数和自主神经系统活动的昼夜变化。 会话之间将间隔至少48小时，以防止遗留效应并允许干预之间的完全生理恢复。 参与者将被要求记录他们对会话前说明的遵守情况、睡眠时长以及任何相关事件或症状，为此目的将提供一个简要日记。

实验会话协议

到达心血管生理学实验室后，将向参与者提醒会话程序并允许提问。 他们将被告知排空膀胱，并在需要时换上舒适、宽松的衣物。 实验室环境将保持在20至22摄氏度的舒适温度，光线调暗以促进放松。 参与者随后将在舒适的检查台上取仰卧位，头部用枕头抬高约30度，以确保在长时间监测期间的舒适度。 请参见实验会话设计。

基线评估阶段（25分钟）

每个实验会话的第一阶段包括一个25分钟的基线评估期，期间参与者在仰卧位安静休息。 他们将被告知放松，以自然呼吸频率正常呼吸，尽可能保持静止，除非必要避免说话。 在此25分钟开始时，Finapres NOVA无创手指动脉血压系统将安装在非优势臂上，包括手指袖带（食指或中指）和肱动脉校准袖带，手臂支撑在心脏水平。 Finapres将连续记录整个25分钟；然而，只有最后10分钟将用作干预前连续心血管基线进行分析。 同时，Polar Unite光学心率传感器将放置在优势手腕上，并将在整个25分钟期间连续记录，最后10分钟用于基线心率和心率变异性数据。 除了连续记录外，将在基线期间的四个时间点获取听诊血压和心率：0、5、10和15分钟。

每次测量将从优势臂使用校准的水银血压计和听诊器进行。 Korotkoff音的第I相和第V相将分别用于确定收缩压和舒张压。 所有听诊测量将由同一位经验丰富的研究者执行，他将对干预条件保持盲态。 最后三次听诊测量（在5、10和15分钟进行）的平均值将作为离散基线血压值进行分析。

干预阶段（60分钟）。

基线评估后，参与者将根据随机分配序列被分配到三种干预条件之一。 干预期为60分钟，适用于所有三种条件。 在此期间，参与者将保持坐姿。 研究团队将从相邻房间通过窗户清晰视野连续监测参与者，并通过对讲机提供双向通信。 将在15、30和45分钟进行简要舒适和安全检查，询问参与者的感受以及是否希望继续。 在干预阶段，参与者可以安静地阅读或使用手机，因为这些低强度活动不会干扰迷走神经刺激设备的安全或功能。 他们将被告知避免过度运动、说话或高度刺激的手机内容，以最小化监测期间的自主神经波动，但允许被动活动如阅读、浏览或听音乐，这在迷走神经刺激研究协议中常用。