PED/PEA-15 protein, PCOS, obezita, indexy citlivosti na inzulín, metformin, perorální antikoncepce

Předměty:

Dvacet obézních žen s PCOS (věk: 24,7±18 let; BMI: 30±2,4 kg/m2) bylo následně přijato na endokrinologické oddělení Kliniky molekulární a klinické endokrinologie a onkologie Federico II University of Neapol a bylo zařazeno do tuto klinickou studii. Diagnóza PCOS byla stanovena podle diagnostických kritérií pro PCOS Při vstupu do studie byli pacienti randomizováni do dvou skupin léčby podle citlivosti na inzulín. Skupina OCP, 10 pacientů (BMI 29,7 ± 1,5 kg/m2) dostávalo 30 ug ethinylestradiolu plus 30 mg drospirenonu 21 dní/měsíc. Skupina MET, 10 pacientů (BMI 30,4±3,1 kg/m2), dostávala metformin 1250 mg třikrát denně. Délka sledování byla 6 měsíců. Kontrolní skupinu tvořilo 10 zdravých dobrovolnic, které měly stejný věk.

Metody:

Protože všechny ženy s PCOS byly anovulační, podstoupily progesteronový provokační test (100 mg přirozeného progesteronu i.m.; Prontogest, Amsa, Řím, Itálie), který vyvolal děložní krvácení u všech žen s PCOS. K vyloučení přítomnosti diabetu 2. typu nebo abnormální glukózové tolerance byl proveden orální glukózový toleranční test (OGTT) a normální glukózová odpověď na OGTT byla definována podle „Zprávy expertního výboru pro diagnostiku a klasifikaci diabetes mellitus '.

Všechna antropometrická měření byla provedena u subjektů pouze v lehkém oblečení a bez obuvi. U každé ženy byla změřena váha a výška pro výpočet BMI [hmotnost (kg) dělená druhou mocninou výšky (m2), kg/m2]. Výška byla měřena s přesností na cm pomocí nástěnného stadiometru. Tělesná hmotnost (BW) byla stanovena s přesností na 50 g pomocí kalibrované váhy.

Pacientům byl poskytnut standardizovaný rozhovor s cílem získat informace o délce trvání obezity, stravovacích zvyklostech, kuřáckých návycích a fyzickém cvičení. Subjekty byly také požádány, aby si denně zaznamenávaly množství fyzické aktivity (žádné cvičení; ≤2-3 h/týden; ≥2-3 h/týden). Příjem potravy a dietní anamnéza byly hodnoceny zkušeným dietologem, který použil počítačově podporovaný rozhovor (Winfood 1.5, Medimatica srl, Martinsicuro, Itálie). Všechny ženy s PCOS dostávaly normokalorickou dietu.

testy:

Vzorky krve byly odebrány mezi 08:00 a 09:00 z antekubitální žíly po celonočním hladovění, s pacientem v klidové poloze. OGTT byl proveden za použití 75 g dextrózy. Vzorky krve byly odebrány v čase 0, 30, 60, 90, 120 minut pro měření glukózy v plazmě a inzulínu. Hladiny glukózy v plazmě nalačno (FPG) byly stanoveny metodou glukózooxidázy bezprostředně po OGTT. Vzorky inzulinu nalačno (FPI) byly okamžitě odstředěny, plazma byla oddělena a skladována při -20 °C až do testu. FPI byl měřen chemiluminiscenčním enzymovým imunotestem na pevné fázi za použití komerčně dostupných souprav (Immunolite Diagnostic Products Co, Los Angeles, CA). Byly vypočteny 1/HOMA-IR, QUICKI a ISI.

Protein PED/PEA-15 byl měřen v lyzátech bílých krvinek (WBC) získaných z 10 až 12 ml čerstvě odebrané nesražené plné krve, po separaci dextranem 6%, pomocí analýzy Western blot. Pro analýzu Western blot byly WBC solubilizovány při 4 °C v TAT pufru, centrifugovány při 500 g po dobu 20 minut a frakce supernatantu byly skladovány při -20 °C až do použití. Množství 50 ug lyzátových proteinů bylo zahříváno na 100 °C v Laemmliho pufru. Proteiny byly odděleny 15% SDS-PAGE a poté přeneseny na 0*45 mm membrány Immobilon-P (Millipore, Bedfort, MA). Filtry byly sondovány PED/PEA-15 antisérem v ředění 1:2000, což bylo odhaleno zvýšenou chemiluminiscencí a autorádiografií. Proteinové pásy byly kvantifikovány laserovou denzitometrií a vyjádřeny jako procento pixelů (libovolné jednotky).