Proteína PED/PEA-15, SOP, Obesidade, Índices de Sensibilidade à Insulina, Metformina, Anticoncepcionais Orais

Assuntos:

Vinte mulheres obesas com SOP (idade: 24,7±18 anos; IMC: 30±2,4 kg/m2) foram consecutivamente admitidas na Unidade de Endocrinologia do Departamento de Endocrinologia Molecular e Clínica e Oncologia da Universidade Federico II de Nápoles, e foram matriculadas no este estudo clínico. O diagnóstico de SOP foi feito de acordo com os critérios diagnósticos para SOP. No início do estudo, as pacientes foram randomizadas em dois grupos de tratamento, de acordo com a sensibilidade à insulina. Grupo OCP, 10 pacientes (IMC 29,7± 1,5 kg/m2) receberam 30 µg de etinilestradiol mais 30 mg de drospirenona 21 dias/mês. Grupo MET, 10 pacientes (IMC 30,4± 3,1 kg/m2), receberam metformina 1250 mg três vezes ao dia. A duração do seguimento foi de 6 meses. O grupo de controle consistiu em 10 voluntárias saudáveis, com idade igual.

Métodos:

Como todas as mulheres com SOP eram anovulatórias, elas foram submetidas a um teste de progesterona (100 mg de progesterona natural i.m.; Prontogest, Amsa, Roma, Itália), que induziu sangramento uterino em todas as mulheres com SOP. Para excluir a presença de diabetes tipo 2 ou tolerância anormal à glicose, o teste oral de tolerância à glicose (OGTT) foi realizado e a resposta normal da glicose ao OGTT foi definida de acordo com o 'Relatório do Comitê de Especialistas no diagnóstico e classificação do diabetes mellitus '.

Todas as medidas antropométricas foram realizadas com os sujeitos vestindo apenas roupas leves e sem sapatos. Em cada mulher, peso e altura foram medidos para calcular o IMC [peso (kg) dividido pela altura ao quadrado (m2), kg/m2]. A altura foi medida até o centímetro mais próximo usando um estadiômetro montado na parede. O peso corporal (PC) foi determinado com precisão de 50 g usando uma balança calibrada.

Os pacientes receberam uma entrevista padronizada para obter informações sobre a duração da obesidade, padrões alimentares, hábitos tabágicos e exercícios físicos. Em particular, os indivíduos também foram solicitados a fazer um registro diário da quantidade de atividade física (sem exercício; ≤2-3 h/semana; ≥2-3 h/semana). A ingestão alimentar pré-admissão e o histórico alimentar foram avaliados por um nutricionista qualificado que usou uma entrevista assistida por computador (Winfood 1.5, Medimatica srl, Martinsicuro, Itália). Todas as mulheres com SOP receberam uma dieta normocalórica.

Ensaios:

As amostras de sangue foram obtidas entre 08h00 e 09h00 de uma veia antecubital após jejum noturno, com o paciente em posição de repouso. O TOTG foi realizado com 75 g de dextrose. Amostras de sangue foram obtidas em 0, 30, 60, 90, 120 minutos para medições de glicose e insulina no plasma. Os níveis de glicose plasmática em jejum (FPG) foram determinados pelo método da glicose oxidase imediatamente após o OGTT. As amostras de insulina plasmática em jejum (FPI) foram prontamente centrifugadas, o plasma foi separado e armazenado a -20°C até o ensaio. O FPI foi medido por um imunoensaio enzimático quimioluminescente em fase sólida usando kits disponíveis comercialmente (Immunolite Diagnostic Products Co, Los Angeles, CA). 1/HOMA-IR, QUICKI e ISI foram calculados.

A proteína PED/PEA-15 foi medida em lisados ​​de glóbulos brancos (WBC) obtidos de 10 a 12 ml de sangue total não coagulado recém-colhido, após separação com dextrano 6%, usando análise de Western blot. Para análise de Western blot WBC foi solubilizado a 4°C em tampão TAT, centrifugado a 500g por 20 min, e as frações sobrenadantes foram armazenadas a -20°C até serem usadas. A quantidade de 50 μg de proteínas lisadas foi aquecida a 100°C em tampão Laemmli. As proteínas foram separadas por SDS-PAGE a 15% e depois transferidas para membranas Immobilon-P de 0,45 mm (Millipore, Bedfort, MA). Os filtros foram sondados com anti-soro PED/PEA-15 na diluição de 1:2000, revelado por quimioluminescência aumentada e autorradiografia. As bandas de proteínas foram quantificadas por densitometria a laser e expressas como porcentagem de pixels (unidades arbitrárias).