Test citlivosti na inzulín s rezistentním škrobem (RESIST)

Návštěvy kliniky:

Účastníci navštíví kliniku celkem 11krát od screeningu do ukončení studie. To bude zahrnovat týdenní návštěvy u dietologa a 7 návštěv vyžadujících odběry krve (screen a dvakrát po každé dietě). Při každé návštěvě budou účastníci zváženi, změřeny obvody pasu a boků a bude monitorován krevní tlak. Celkové množství odebrané krve je 450 ml.

Prohlídka (V1: 1 hodina):

Náboroví pracovníci nejprve určí způsobilost prostřednictvím přezkoumání screeningového dotazníku a telefonického nebo osobního pohovoru. Pokud je potenciální subjekt způsobilý a má zájem, bude mu zaslán orientační balíček, který bude obsahovat písemné informace o požadavcích studia. Zainteresované subjekty budou naplánovány na screeningovou návštěvu, aby klinický personál určil konečnou způsobilost. Při screeningové návštěvě (V1) bude získán informovaný souhlas, získaná antropometrická měření (výška, váha, obvod pasu, krevní tlak) a bude odebrána krev (30 ml) pro posouzení laboratorních kritérií pro zařazení do studie (celkový cholesterol, LDL-cholesterol HDL-cholesterol, triglyceridy, glukóza a inzulín pro stanovení HOMA-IR). Screeningové vzorky krve od osob, které buď nejsou způsobilé nebo nechtějí přistoupit k intervenci, budou zničeny. Provedeme screening těhotenství a zopakujeme těhotenské testy po všech „A“ návštěvách (V2a, v3a, v4a). Menstruující ženy dostanou kalendář pro záznam jejich menstruačního cyklu po dobu trvání studie. Způsobilí jedinci budou kontaktováni do 2 týdnů od této návštěvy a pozváni k účasti ve studii. Jsme připraveni zapsat do této studie až 64 účastníků, abychom dosáhli cílového počtu 52 dokončených účastníků (20% výpadek).

Návštěvy dietologa (počáteční: 1 hodina, následující: 15 minut):

Účastníci se budou každý týden setkávat s dietologem nebo dietologem, aby jim bylo poskytnuto poradenství včetně řízení hmotnosti a přezkoumání stravy. Na těchto setkáních dostanou účastníci týdenní mražené předkrmy, standardizované menu s kontrolními seznamy a rozepsané seznamy potravin. V tuto chvíli bude k dispozici také pečivo a výrobky obsahující testovací škroby. Forma, ve které budou poskytnuty (zmrazené nebo čerstvé), bude záviset na povaze produktu a jeho schopnosti vydržet skladování v chladničce nebo ve zmrazeném stavu. Během vymývacího období (dny 28-42) se subjekty budou i nadále zdržovat alkoholu, ale budou konzumovat svou obvyklou domácí stravu po dobu 7 dnů, po níž bude následovat základní dieta po dobu dalších 7 dnů. Očekáváme, že pokud účastníkům povolíte jíst, co chtějí po dobu 7 dní během vymývání, zlepší se jejich dodržování během zbytku dietního protokolu.

Účastníci přinesou účtenky z obchodu s potravinami z minulého týdne, aby dietologové mohli zajistit nákup předepsaných potravin, které nezajišťuje Bionutriční jednotka.

Návštěvy po dietě vyžadující odběry krve (A návštěvy: 2,5 hodiny, B návštěvy: 5 hodin):

Účastníci navštíví kliniku dva oddělené dny po ukončení každé diety, aby poskytli vzorky krve. Duplicitní odběr vzorků snižuje biologickou variabilitu, a tím zlepšuje schopnost studie detekovat významné změny v měření způsobené stravou. Předposlední den každé diety (návštěvy 2A, 3A, 4A) účastníci navštíví kliniku nalačno a poskytnou nalačno vzorek krve (30 ml) pro měření celkového, LDL- a HDL-cholesterolu, triglyceridů, apolipoproteinů A1 a B a lipoproteinová subfrakční analýza pomocí iontové mobility. Aktivity lipoproteinové lipázy a jaterní lipázy budou také měřeny v plazmě (20 ml) získané 15 minut po IV heparinu (75 jednotek/kg). Poslední den každé diety (návštěvy 2B, 3B, 4B) účastníci poskytnou druhý vzorek krve nalačno (pro lipidy a lipoproteiny, jak je uvedeno výše) a aspiraci z tukové tkáně k měření exprese lipogenních genů. Kromě toho bude při návštěvách 3B a 4B provedeno 3hodinové jídlo s tolerancí škrobu se vzorky krve pro měření glukózy a inzulínu odebranými nalačno a 30, 60, 120 a 180 minut po jídle obsahujícím škrob (celkem 60 ml).

Klinické postupy:

Klinická měření: Krevní tlak bude měřen 3x v sedě a poslední 2 hodnoty zprůměrovány. Antropometrická měření zahrnují výšku, váhu, obvod pasu a boků a % tělesného tuku pomocí bioimpedance (Tanitova stupnice). Obvod pasu se měří dvakrát u hřebene kyčelního kloubu a obvod kyčle se měří v nejširším místě boků.

Standardní odběry krve: Při použití standardních postupů odběru krve budou vzorky odebírány účastníkům po 12-14 hodinovém půstu. Krev bude odebírána do zkumavek obsahujících následující konzervační roztok: 3,0 g EDTA (draslík), 1,7 mg P-Pack, 0,15 g gentamycin sulfátu, 0,15 g chloramfenikolu, 5,96 ml aprotininu (Sigma A-6230 gs azid.0 gs sodný). všechny se zředí na 20 ml dvakrát deionizovanou vodou. Plazma se oddělí okamžitou centrifugací při 4 °C. Provedou se měření lipidů a lipoproteinů a alikvoty plazmy se zmrazí pro budoucí analýzy.

Odběr vzorků krve po heparinu:

Vzorek krve (20 ml) bude odebrán 15 minut po intravenózním podání bolusu heparinu (75 U/kg, odůvodnění viz část Riziko) pro analýzu aktivity plazmatické lipázy. Před podáním budou účastníci dotazováni na rodinnou anamnézu poruch srážlivosti nebo osobní kontraindikace včetně použití antikoagulancií, anamnézu abnormalit krvácení nebo modřin nebo jiných onemocnění, alergií nebo nedávné zubní práce. Po podání zůstanou účastníci na klinice 2 hodiny na pozorování. Obdrží také informační list týkající se heparinu a postupu.

Biopsie tukové tkáně:

Tukové biopsie budou odebírány ze subkutánní přilehlé oblasti R.N. za použití standardizovaného sterilního postupu. Účastníci budou poučeni, aby do 2 dnů od zákroku neužívali žádné léky, které by zhoršovaly srážlivost. Tento postup bude probíhat alespoň 24 hodin po post-heparinové lipázové analýze. Protože poločas heparinu je 2 hodiny, je to dostatečná doba k zajištění clearance. Po vyčištění oblasti nad hýždě účastníka betadinem bude do podkoží injikován lidokain hydrochlorid 1% (10 mg/ml). Pomocí jehly 14G se odsaje 1-1,5 ccm tuku. Na místě bude držen studený tlak a poté bude rána obvázána. Účastníci budou instruováni, aby si obvaz vyměnili jednou denně po dobu dvou dnů. Budou jim poskytnuty dva obvazy, pokyny k udržování rány v čistotě a telefonní číslo, na kterém je k zastižení klinický personál.

Test škrobové moučky:

Bezprostředně po biopsii tukové tkáně a odběru krve nalačno dostanou účastníci škrobové jídlo, které poskytuje 1/3 denních kalorií, které mají být zkonzumovány za 15 minut. Složením makroživin se bude podobat testovací dietě, ke které je účastník zařazen, a bude mít vysoký obsah amylózy nebo amylopektinu. Krev bude odebrána 30, 60, 120 a 180 minut po konzumaci jídla prostřednictvím IV. Při tomto postupu se do předloktní žíly zavede intravenózní kanyla nebo jehla. Normální fyziologický roztok bude v antekubitálním místě přiváděn při zachování otevřené rychlosti.