Prova di sensibilità all'insulina dell'amido resistente (RESIST)

Visite Cliniche:

I partecipanti visiteranno la clinica per un totale di 11 volte dallo schermo al completamento dello studio. Ciò includerà visite settimanali con un dietologo e 7 visite che richiedono prelievi di sangue (schermo e due volte dopo ogni periodo di dieta). Ad ogni visita, i partecipanti verranno pesati, verranno misurate le circonferenze della vita e dell'anca e verrà monitorata la pressione sanguigna. La quantità totale di sangue raccolto è di 450 ml.

Visita di screening (V1: 1 ora):

I reclutatori determineranno inizialmente l'idoneità attraverso la revisione di un questionario di screening e un colloquio telefonico o personale. Se un potenziale soggetto è idoneo e interessato, verrà inviato un pacchetto di orientamento che includerà informazioni scritte sui requisiti di studio. I soggetti interessati saranno programmati per una visita di screening per determinare l'idoneità finale da parte del personale clinico. Alla visita di screening (V1), sarà ottenuto il consenso informato, saranno ottenute le misurazioni antropometriche (altezza, peso, circonferenza della vita, pressione sanguigna) e sangue (30 ml) per valutare i criteri di laboratorio per l'arruolamento (colesterolo totale, colesterolo LDL , colesterolo HDL, trigliceridi, glucosio e insulina per la determinazione di HOMA-IR). I campioni di sangue di screening di individui che non sono idonei o non sono disposti a procedere con l'intervento verranno distrutti. Effettueremo lo screening per la gravidanza e ripeteremo i test di gravidanza dopo tutte le visite "A" (V2a, v3a, v4a). Alle donne mestruate verrà fornito un calendario per registrare il loro ciclo mestruale per la durata dello studio. Le persone idonee saranno contattate entro 2 settimane da questa visita di screening e invitate a partecipare allo studio. Siamo pronti ad arruolare fino a 64 partecipanti a questo studio per ottenere un obiettivo di 52 partecipanti completati (abbandono del 20%).

Visite dal dietista (iniziale: 1 ora, successiva: 15 min):

I partecipanti si incontreranno settimanalmente con un dietista o un assistente dietologo per ricevere consulenza, compresa la gestione del peso e la revisione della dieta. A questi incontri, i partecipanti riceveranno una settimana di antipasti surgelati, menu standardizzati con liste di controllo e liste della spesa dettagliate. In questo periodo verranno forniti anche prodotti da forno e prodotti contenenti gli amidi di prova. La forma in cui verranno forniti (congelati o freschi) dipenderà dalla natura del prodotto e dalla sua capacità di resistere allo stoccaggio refrigerato o congelato. Durante il periodo di washout (giorni 28-42), i soggetti continueranno ad astenersi dall'alcol ma consumeranno la loro solita dieta casalinga per 7 giorni, seguita dalla dieta di base per altri 7 giorni. Prevediamo che dare ai partecipanti il ​​permesso di mangiare ciò che vogliono per 7 giorni durante il periodo di washout migliorerà la loro compliance durante il resto del protocollo dietetico.

I partecipanti porteranno le ricevute del negozio di alimentari della settimana precedente in modo che i dietisti possano garantire l'acquisto di alimenti prescritti non forniti dall'Unità di Bionutrizione.

Visite post-dieta che richiedono prelievi di sangue (visite A: 2,5 ore, visite B: 5 ore):

I partecipanti visiteranno la clinica in due giorni separati dopo il completamento di ciascuna dieta per fornire campioni di sangue. Il campionamento duplicato riduce la variabilità biologica e quindi migliora la capacità dello studio di rilevare cambiamenti significativi nella misurazione indotti dalla dieta. Il penultimo giorno di ogni dieta (visite 2A, 3A, 4A) i partecipanti visiteranno la clinica a digiuno e forniranno un campione di sangue a digiuno (30 ml) per la misurazione del colesterolo totale, LDL e HDL, trigliceridi, apolipoproteine ​​A1 e B, e analisi della sottofrazione lipoproteica mediante mobilità ionica. L'attività della lipoproteina lipasi e della lipasi epatica sarà misurata anche nel plasma (20 ml) ottenuto 15 minuti dopo eparina EV (75 unità/kg). L'ultimo giorno di ogni dieta (visite 2B, 3B, 4B), i partecipanti forniranno un secondo campione di sangue a digiuno (per lipidi e lipoproteine ​​come sopra) e un'aspirazione del tessuto adiposo per misurare l'espressione del gene lipogenico. Inoltre, alle visite 3B e 4B verrà eseguito un pasto di tolleranza all'amido di 3 ore, con campioni di sangue per misurare il glucosio e l'insulina prelevati a digiuno e 30, 60, 120 e 180 minuti dopo un pasto a base di amido (60 ml in totale).

Procedure cliniche:

Misurazioni cliniche: La pressione sanguigna verrà misurata 3 volte in posizione seduta e gli ultimi 2 valori saranno mediati. Le misurazioni antropometriche includono altezza, peso, circonferenza della vita e dei fianchi e % di grasso corporeo per bioimpedenza (scala Tanita). La circonferenza della vita viene misurata due volte sulla cresta iliaca e la circonferenza dell'anca viene misurata nel punto più largo dei fianchi.

Prelievo di sangue standard: utilizzando le procedure standard di raccolta del sangue, i campioni di sangue verranno raccolti dai partecipanti dopo un digiuno di 12-14 ore. Il sangue verrà raccolto in provette contenenti la seguente soluzione conservante: 3,0 g di EDTA (dipotassio), 1,7 mg di P-Pack, 0,15 g di gentamicina solfato, 0,15 g di cloramfenicolo, 5,96 ml di aprotinina (Sigma A-6279) e 0,30 g di sodio azide il tutto diluito a 20 ml con acqua doppiamente deionizzata. Il plasma viene separato mediante centrifugazione immediata a 4°C. Vengono eseguite le misurazioni dei lipidi e delle lipoproteine ​​e le aliquote di plasma vengono congelate per analisi future.

Prelievo di sangue post-eparina:

Un campione di sangue (20 ml) verrà prelevato 15 minuti dopo la somministrazione endovenosa di un bolo di eparina (75 U/kg, vedere la sezione Rischio per la giustificazione) per l'analisi dell'attività della lipasi plasmatica. Prima della somministrazione, i partecipanti saranno intervistati per la storia familiare di disturbi della coagulazione o controindicazioni personali compreso l'uso di anticoagulanti, storia di anomalie di sanguinamento o lividi o altre malattie, allergie o recenti interventi dentistici. Dopo la somministrazione, i partecipanti rimarranno in clinica per 2 ore sotto osservazione. Verrà inoltre fornito un foglio informativo relativo all'eparina e alla procedura.

Biopsia del tessuto adiposo:

Le biopsie adipose saranno prelevate dalla regione fiancheggiante sottocutanea mediante un R.N. utilizzando una procedura standardizzata e sterile. I partecipanti verranno istruiti a non assumere farmaci entro 2 giorni dalla procedura che comprometterebbero la coagulazione. Questa procedura avrà luogo almeno 24 ore dopo l'analisi della lipasi post-eparina. Poiché l'emivita dell'eparina è di 2 ore, questo è un tempo sufficiente per garantire la clearance. Dopo aver pulito l'area sopra il gluteo del partecipante con betadina, verrà iniettata la lidocaina cloridrato all'1% (10 mg/ml) nella pelle sottocutanea. Utilizzando un ago numero 14G, verranno aspirati 1-1,5 c.c. di grasso. La pressione fredda verrà tenuta sul posto e poi la ferita verrà fasciata. Ai partecipanti verrà chiesto di cambiare la benda una volta al giorno per due giorni. Verranno fornite loro due bende, istruzioni per mantenere pulita la ferita e un numero di telefono dove è possibile raggiungere il personale clinico.

Test della farina di amido:

Immediatamente dopo la biopsia del tessuto adiposo e il prelievo di sangue a digiuno, ai partecipanti verrà somministrato un pasto a base di amido che fornisce 1/3 delle calorie giornaliere da consumare in 15 minuti. Sarà simile nella composizione dei macronutrienti alla dieta di prova a cui è assegnato il partecipante e sarà ricca di amilosio o amilopectina. Il sangue verrà prelevato 30, 60, 120 e 180 minuti dopo il consumo del pasto attraverso una flebo. Per questa procedura, una cannula o un ago endovenoso verrà inserito nella vena antecubitale. Una normale soluzione salina verrà eseguita a una velocità di mantenimento aperto nel sito antecubitale.