Mateřská obezita, složení mateřského mléka a růst kojenců ((MILK))

Obecný plán studie Ve druhém trimestru těhotenství bude vybrána prospektivní observační těhotenská kohorta 360 nediabetických matek, které výlučně kojí své děti alespoň 1 měsíc po porodu, a to napříč širokým rozsahem BMI matek před těhotenstvím, se stejným počtem žen s normální hmotností, nadváhou a obezitou. Ženy budou přijaty do dvou studijních center (University of Oklahoma Health Sciences Center v Oklahoma City, OK a Health Partners Research Foundation v Saint Paul/Minneapolis, MN), přičemž strava matek a kojenců, složení těla a metabolické zdraví budou prospektivně sledovány od 1. , 3 a 6 měsíců po porodu ve specifických cílech 1 a 2. Ve specifickém cíli 3 bude podskupina 60 těchto matek/kojenců "Mothers in Focus" (30 matek OB a 30 matek NW) přijata pro další biovzorky odběr, včetně vzorků mléka ve 2. a 6. měsíci, změny složení těla matky pomocí DXA, kojenecká DXA, metabolomické srovnání sériových vzorků mléka a sledování do 12, nikoli 6 měsíců.

Prvky sběru dat:

Mateřská adipozita. Stav BMI matky před otěhotněním (NW, OW, OB) je primární expozicí používanou k podpoře studie. BMI před těhotenstvím bude stanoveno pomocí prvních (základních) klinických vah z elektronických lékařských záznamů (EMR) (ne více než 90 dní po poslední menstruaci) a postavy změřené výzkumným personálem při první návštěvě matky v našich výzkumných centrech. . BMI bude kategorizováno jako podváha (BMI <18,5), normální váha (BMI 18,5 - <25), nadváha (BMI 25 - <30) a obezita (BMI ≥30 kg/m2).

Gestační přírůstek hmotnosti (GWG) a poporodní úbytek/udržení hmotnosti: Celkový GWG bude vypočítán jako rozdíl mezi porodní hmotností a výchozí hmotností (jak je zdokumentováno výše). Pokud hmotnost při porodu není k dispozici, použije se poslední prenatální hmotnost v EMR, ≤ 14 dní od narození. GWG specifický pro trimestr se vypočítá z EMR. GWG se bude používat jako kontinuální a jako kategorická expozice (nadměrná, vhodná a nedostatečná, podle pokynů IOM 2009). Bude se počítat časné hubnutí PP (od porodu do 1 měsíce po porodu), pozdější hubnutí PP od 1 měsíce do 3 měsíců. Budou zkoumány souběžné změny v hmotnosti matky a hladin adipocytokinu v mléce od 0 do 1 měsíce a od 1 do 3 měsíců s hypotézou, že větší úbytek hmotnosti PP (nižší retence hmotnosti) je spojen s nižšími hladinami adipocytokinů v mléce.

Odběr mléka: Změny ve složení mléka budou hodnoceny od 1 do 3 měsíců. Definice výhradního kojení: Personál studie potvrdí, že všechna kojenci byla krmena výhradně mateřským mlékem (tj. žádné umělé mléko, žádné tekutiny kromě vody a žádné pevné látky) alespoň 14 dní před 1měsíční návštěvou a plánujete pokračovat v výlučném kojení do 3 měsíců. Výhradní krmení mateřským mlékem bude zahrnovat jakoukoli kombinaci odsátého mateřského mléka a mateřského mléka přiváděného přes prsa.

Protokol odběru mateřského mléka: Matka a dítě se budou hlásit na místo studie 1 a 3 měsíce (± 5 dní) po porodu, mezi 8:00-10:00, alespoň 1½ hodiny od posledního kojení a dokud matka nemá postil se alespoň 1 hodinu. Hmotnost kojence před kojením bude získána pomocí stupnice vysoké citlivosti, matka bude vyzvána, aby krmila dítě ad libitum z obou prsů, dokud nebude spokojeno vůlí, a bude získána hmotnost kojence po kojení (rozdíl = produkce mléka). Údaje z dotazníku, antropometrie matky a údaje o složení těla kojence budou shromážděny a o 2 hodiny později matka poskytne jeden vzorek exprese prsu pomocí elektrické odsávačky (Medela, Inc., poskytnutá studijním týmem). Mateřské mléko bude smícháno, rozděleno na alikvoty a skladováno při -80°C.

Mléčné adipocytokinové testy: Vzorky mléka budou rozmraženy v chladničce a promíchány na vortexu. Mléčný tuk se oddělí od vodné fáze centrifugací při 3000 g po dobu 10 minut při 4 °C. Výsledné odstředěné mléko bude testováno pomocí komerčně dostupných imunoanalytických souprav pro inzulín, IGF-1/BP, adiponektin s vysokou molekulovou hmotností, visfatin, leptin, IL-lp, IL-6, IL-10 a TNF-a. Glukóza bude měřena metodou glukózooxidázy. Pro zkoumání dalších koncentrací cytokinů a růstových faktorů (např. interleukiny, interferony, TGF-p) způsobem, který šetří vzorek, se použije multiplexní test (EMD Millipore, Billerica, MA) a analyzátor Luminex 200 Multiplex.

Analýza dat pro konkrétní cíl 1: Pro každý z mléčných adipocytokinů (kontinuální závislé proměnné) budou zkonstruovány samostatné regresní modely se smíšenými efekty (aby se zohlednily sériové údaje o mléce), nejprve se otestují hrubé asociace mléčného IL-6 na 1 a 3 -měsíce s každou proměnnou mateřské adipozity (nadměrný GWG, stav BMI před těhotenstvím, celkový GWG, trimestrově specifický GWG, časný a pozdější PP úbytek hmotnosti) a poté minimálně upravené modely (také přizpůsobení pohlaví kojenců a gestačnímu věku, studijní centrum (OK nebo MN), věk matky, parita, etnická příslušnost a socioekonomický status matky) a konečně plně upravené regresní modely včetně těch proměnných, které byly určeny jako potenciální zmatky. V sekundárních analýzách bude posouzena možná modifikace efektu asociací mateřské adipozity přidáním interakčních pojmů. Pokud je interakční člen významný, provede se stratifikovaná analýza.

Sběr dat pro konkrétní cíl 2 Složení těla kojence. Celkové tělesné složení bude měřeno pomocí air displacement pletysmografie (ADP), tzn. Hrachový lusk (v 3.1.1), rychlá, validní, vysoce spolehlivá (% tuku CV% < 2,5 % v našich rukou) metoda odhadu celkového tělesného objemu, ze které se pomocí predikčních rovnic určuje celkový tělesný tuk (FM) a hmotnost bez tuku (FFM). University of Minnesota i University of Oklahoma mají stejný ADP (stejný výrobce, model a verze softwaru).

Kojenecká sekrece inzulínu a rezistence po 6 měsících: Bude sbírán C-peptid nebo spojovací peptid jako marker sekrece inzulínu. Sérový C-peptid je vylučován v ekvimolárních množstvích slinivkou jako inzulín, ale je stabilnějším měřítkem, protože není náchylný k degradaci po hemolýze. C-peptid byl použit jako marker funkce fetálních beta-buněk ve studii HAPO (Hyperglycemia and Adverse Pregnancy Out-come) k posouzení účinků mateřské obezity a gestačního diabetu na nepříznivé výsledky těhotenství a kojenců. Inzulinová rezistence bude odhadnuta pomocí hodnocení modelu homeostázy (HOMA-IR). Krev bude odebrána pomocí patní tyčinky u kojence v době 6měsíční návštěvy studijního centra, jak je běžné v našich laboratořích, což poskytuje ~ 1,0 cm3 krve. Plná krev bude až do odstředění v našich laboratořích uchovávána na ledu a 0,5 ml séra rozděleno na alikvoty při teplotě -80 C, dokud nebude odesláno do laboratoře Dr. Fieldse k analýze pomocí ELISA (Millipore, Billerica, MA; Intra-assay CV = 5 CV mezi testy = 6 %). Interpretace C-peptidu vyžaduje hladinu glukózy v krvi, která bude měřena ve stejném krevním vzorku metodou glukózooxidázy.

Obsah makroživin v mléce: Celkový obsah tuku bude měřen Mojonnierovou metodou Složení mastných kyselin bude hodnoceno plynovou chromatografií za použití metod Mezinárodní mlékárenské federace (IDF). Další standardní metody budou kvantifikovat celkový dusík, popel, vlhkost a uhlohydráty.

Chuť k jídlu, sytost a strava kojenců: Zkrácené verze dotazníků o dietě kojenců použitých ve studii kojenecké praxe II v 1. měsíci, 3. měsíci a 6. měsíci posoudí zprávu matky o příjmu stravy kojence. Mateřské vnímání chuti k jídlu kojenců bude měřeno pomocí dotazníku Baby Eating Behaviour Questionnaire. Spánek kojenců: Dotazník Sadeh Brief Spánek kojenců byl ověřen proti aktigrafii a bude použit k posouzení chování při spánku při každé návštěvě. Další potenciální zmatky: Viz konkrétní cíl 1.

Analýza dat (Specifický cíl 2) Statistická analýza: Zastřešující primární hypotéza je, že koncentrace mléčného adipocytokinu budou spojeny se změněným složením těla ve věku od 1 do 6 měsíců a se zvýšeným C-peptidem nebo HOMA-IR v 6 měsících, nezávislý na potenciálních matoucích. Příklad hypotéza 2.a1: Vyšší hladiny hormonu leptinu potlačujícího chuť k jídlu v 1. a/nebo 3. měsíci budou spojeny s nižším přírůstkem hmotnosti kojence, což odráží specificky nižší přírůstek FFM od 1 do 6 měsíců. K řešení této a souvisejících hypotéz použijeme lineární a logistickou regresi se smíšenými efekty jako primární přístup analýzy. Údaje o růstu a složení těla budou sériové (0 [pro váhu], 1, 3 a 6 měsíců), které budou zkoumány pomocí modelů se smíšenými účinky, které modelují kovarianční strukturu opakovaných měření v rámci subjektu a umožňují subjektově specifické průsečík a svahy, které mají být modelovány. Mléčné adipocytokiny jsou nezávislé proměnné, které nás zajímají. Vzhledem k tomu, že jejich individuální vztahy k růstu kojenců a dalším výsledkům nemusí být lineární, budou zkoumány kvintily nebo kvartily mléčných adipocytokinů a také spojitě distribuované proměnné. Vícenásobné mléčné adipocytokiny budou zahrnuty současně do finálních modelů, aby se otestovaly jejich nezávislé účinky na výsledky kojenců a aby se vyhodnotily jejich agregované účinky (vysvětleno rozptylem).