Obesità materna, composizione del latte materno e crescita infantile ((MILK))

Disegno generale dello studio Una coorte osservazionale prospettica di gravidanza di 360 madri non diabetiche, che allattano esclusivamente i loro bambini per almeno 1 mese dopo il parto, sarà reclutata nel secondo trimestre di gravidanza, attraverso un'ampia gamma di BMI materno pre-gravidanza, con un numero uguale di donne normopeso, in sovrappeso e obese. Le donne saranno reclutate presso due centri di studio (University of Oklahoma Health Sciences Center a Oklahoma City, OK e Health Partners Research Foundation a Saint Paul/Minneapolis, MN), con dieta materna e infantile, composizione corporea e salute metabolica seguite in modo prospettico a 1 , 3 e 6 mesi dopo il parto negli Obiettivi Specifici 1 e 2. Nell'Obiettivo Specifico 3, un sottogruppo di 60 di queste diadi madre/bambino "Mothers in Focus" (30 madri OB e 30 NW) sarà reclutato per ulteriori biocampioni raccolta, inclusi campioni di latte a 2 e 6 mesi, modifiche della composizione corporea materna mediante DXA, DXA infantile, confronto metabolomico di campioni seriali di latte e follow-up fino a 12 mesi anziché a 6 mesi.

Elementi di raccolta dati:

Adiposità materna. Lo stato del BMI materno pre-gravidanza (NW, OW, OB) è l'esposizione primaria utilizzata per alimentare lo studio. L'indice di massa corporea pre-gravidanza sarà determinato utilizzando i primi pesi clinici (di riferimento) dalle cartelle cliniche elettroniche (EMR) (non più di 90 giorni dopo l'ultimo periodo mestruale) e la statura misurata dal personale di ricerca alla prima visita della madre ai nostri centri di ricerca . Il BMI sarà classificato come sottopeso (BMI <18,5), peso normale (BMI 18,5 - <25), sovrappeso (BMI 25 - <30) e obeso (BMI ≥30 kg/m2).

Aumento di peso gestazionale (GWG) e perdita/ritenzione di peso postpartum: il GWG totale sarà calcolato come la differenza tra il peso alla consegna e il peso basale (come documentato sopra). Se il peso al parto non è disponibile, verrà utilizzato l'ultimo peso prenatale nell'EMR, ≤14 giorni dalla nascita. Il GWG specifico del trimestre sarà calcolato dall'EMR. GWG sarà utilizzato come esposizione continua e categoriale (eccessiva, appropriata e insufficiente, secondo le linee guida IOM 2009). Verrà calcolata la perdita di peso PP precoce (dal parto a 1 mese dopo il parto) e successivamente la perdita di peso PP da 1 mese a 3 mesi PP. Saranno esaminate le variazioni concomitanti del peso materno e dei livelli di adipocitochine del latte da 0 a 1 mese e da 1 a 3 mesi, ipotizzando che una maggiore perdita di peso PP (minore ritenzione di peso) sia associata a livelli più bassi di adipocitochine del latte.

Raccolta del latte: i cambiamenti nella composizione del latte saranno valutati da 1 a 3 mesi. Definizione di allattamento esclusivo al seno: il personale dello studio confermerà che tutti i bambini sono stati allattati esclusivamente con latte materno (ad es. nessuna formula, nessun liquido diverso dall'acqua e nessun solido) almeno 14 giorni prima della visita di 1 mese e pianificare di continuare ad allattare esclusivamente al seno fino a 3 mesi. L'alimentazione esclusiva con latte materno includerà qualsiasi combinazione di latte materno spremuto e latte materno somministrato per via materna.

Protocollo per la raccolta del latte materno: madre e bambino si presenteranno al centro dello studio a 1 e 3 mesi (± 5 giorni) dopo il parto, tra le 8:00 e le 10:00, almeno 1 ora e mezza dall'ultima poppata e mentre la madre ha digiuno da almeno 1 ora. Si otterrà un peso del neonato prima dell'allattamento utilizzando una scala ad alta sensibilità, la madre sarà incoraggiata ad allattare il bambino ad libitum da entrambi i seni fino a quando non sarà soddisfatta volontariamente e si otterrà un peso del neonato dopo l'allattamento (differenza = produzione di latte). Verranno raccolte le informazioni del questionario, l'antropometria materna e i dati sulla composizione corporea del bambino e, 2 ore dopo, la madre fornirà un singolo campione di espressione del seno utilizzando un tiralatte elettrico (Medela, Inc., fornito dal team di studio). Il latte materno sarà miscelato, aliquotato e conservato a -80°C.

Saggi di adipocitochine nel latte: I campioni di latte saranno scongelati in frigorifero e vortexati. Il grasso del latte sarà separato dalla fase acquosa mediante centrifugazione a 3.000 g per 10 minuti a 4°C. Il latte scremato risultante sarà analizzato utilizzando kit di dosaggio immunologico disponibili in commercio per insulina, IGF-1/BP, adiponectina ad alto peso molecolare, visfatina, leptina, IL-1β, IL-6, IL-10 e TNF-α. Il glucosio sarà misurato con il metodo della glucosio ossidasi. Per esaminare ulteriori concentrazioni di citochine e fattori di crescita (ad esempio, interleuchine, interferoni, TGF-β) in modo da conservare il campione, verranno impiegati un test multiplex (EMD Millipore, Billerica, MA) e l'analizzatore Luminex 200 Multiplex.

Analisi dei dati per l'obiettivo specifico 1: per ciascuna delle adipocitochine del latte (variabili dipendenti continue), verranno costruiti modelli di regressione a effetti misti separati (per tenere conto dei dati seriali sul latte), testando prima le associazioni grezze di IL-6 del latte sia a 1 che a 3 -mesi con ciascuna variabile di adiposità materna (GWG eccessivo, stato del BMI pre-gravidanza, GWG totale, GWG specifico del trimestre, perdita di peso PP precoce e successiva), e quindi modelli minimamente aggiustati (aggiustando anche per sesso infantile ed età gestazionale, centro studi (OK o MN), età materna, parità, etnia e stato socioeconomico materno) e infine modelli di regressione completamente adattati, comprese quelle variabili ritenute potenziali fattori di confusione. In analisi secondarie, l'eventuale modifica dell'effetto delle associazioni di adiposità materna sarà valutata aggiungendo termini di interazione. Se il termine di interazione è significativo, verrà condotta un'analisi stratificata.

Raccolta di dati per l'obiettivo specifico 2 Composizione corporea infantile. La composizione corporea totale sarà misurata utilizzando la pletismografia a spostamento d'aria (ADP), ad es. Baccello di pisello (v 3.1.1), un metodo rapido, valido, altamente affidabile (% grasso CV% < 2,5% nelle nostre mani) di stima del volume corporeo totale da cui il grasso corporeo totale (FM) e la massa magra (FFM) vengono determinati utilizzando equazioni di previsione. Sia l'Università del Minnesota che l'Università dell'Oklahoma hanno lo stesso ADP (stesso produttore, modello e versioni software).

Secrezione di insulina infantile e resistenza a 6 mesi: Verrà raccolto il C-peptide, o peptide di collegamento, come marcatore della secrezione di insulina. Il peptide C sierico viene secreto in quantità equimolari dal pancreas come insulina, ma è una misura più stabile perché non è soggetto a degradazione dopo l'emolisi. Il peptide C è stato utilizzato come marcatore della funzione delle cellule beta fetali nello studio HAPO (Hyperglycemia and Adverse Pregnancy Out-come) per valutare gli effetti dell'obesità materna e del diabete gestazionale sugli esiti avversi della gravidanza e del bambino. La resistenza all'insulina sarà stimata utilizzando il modello di valutazione dell'omeostasi (HOMA-IR). Il sangue verrà prelevato tramite stick al tallone nel bambino al momento della visita di 6 mesi al centro di studio, come di routine nei nostri laboratori, che produce ~ 1,0 cc di sangue. Il sangue intero sarà tenuto in ghiaccio fino alla centrifugazione nei nostri laboratori e 0,5 mL di siero aliquotato conservato a -80 C fino alla spedizione al laboratorio del Dr. Fields per l'analisi utilizzando ELISA (Millipore, Billerica, MA; CV intra-dosaggio = 5 %; CV inter-saggio = 6%). L'interpretazione del peptide C richiede il livello di glucosio nel sangue che sarà misurato nello stesso campione di sangue utilizzando il metodo della glucosio ossidasi.

Contenuto di macronutrienti nel latte: il contenuto totale di grassi sarà misurato con il metodo Mojonnier La composizione in acidi grassi sarà valutata mediante gascromatografia utilizzando i metodi della International Dairy Federation (IDF). Altri metodi standard quantificano l'azoto totale, le ceneri, l'umidità e i carboidrati.

Appetito, sazietà e dieta del neonato: le versioni abbreviate dei questionari sulla dieta del neonato utilizzati nello Studio II sulle pratiche di alimentazione del neonato a 1 mese, 3 mesi e 6 mesi valuteranno il rapporto materno sull'assunzione dietetica del neonato. La percezione materna dell'appetito infantile sarà misurata utilizzando il questionario sul comportamento alimentare del bambino. Sonno infantile: il questionario Sadeh Brief Infant Sleep è stato convalidato rispetto all'attigrafia e verrà utilizzato per valutare il comportamento del sonno ad ogni visita. Ulteriori potenziali fattori di confusione: vedere l'obiettivo specifico 1.

Analisi dei dati (obiettivo specifico 2) Analisi statistica: l'ipotesi primaria generale è che le concentrazioni di adipocitochine del latte saranno associate a una composizione corporea alterata da 1 a 6 mesi di età e con livelli elevati di peptide C o HOMA-IR a 6 mesi, indipendente da potenziali fattori confondenti. Esempio Ipotesi 2.a1: Livelli più elevati dell'ormone soppressore dell'appetito leptina a 1 e/o 3 mesi saranno associati a un minore aumento di peso del bambino, riflettendo specificamente un minore guadagno di FFM da 1 a 6 mesi. Useremo la regressione lineare e logistica con effetti misti come approccio di analisi principale per affrontare questa e le ipotesi correlate. I dati sulla crescita e sulla composizione corporea saranno seriali (0 [per peso], 1, 3 e 6 mesi), che saranno esaminati utilizzando modelli a effetti misti che modellano la struttura di covarianza delle misure ripetute all'interno del soggetto e consentono specifiche per soggetto intercetta e pendii da modellare. Le adipocitochine del latte sono le variabili indipendenti di interesse. Poiché le loro relazioni individuali con la crescita infantile e altri esiti potrebbero non essere lineari, verranno esaminati quintili o quartili di adipocitochine del latte così come variabili distribuite continuamente. Più adipocitochine del latte saranno incluse simultaneamente nei modelli finali, per testare i loro effetti indipendenti sugli esiti infantili e per valutare i loro effetti aggregati (spiegazione della varianza).