DC-STAMP & TRAF3: Regulátory osteoklastogeneze a biomarkery u PsA (Incubator)

Psoriatická artritida (PsA), zánětlivé onemocnění kloubů spojené s psoriázou (Ps), postihuje přibližně 650 000 dospělých ve Spojených státech a je spojeno se zvýšenou morbiditou a mortalitou. Poškození kostí se vyvine u poloviny těchto pacientů během prvních dvou let onemocnění, což často vede k poškození funkce a snížené kvalitě života. Vznik terapií protinádorovým nekrotizujícím faktorem (TNFi) dramaticky zlepšil klinickou odpověď a zpomalil degradaci kostí a chrupavek u pacientů s PsA, avšak pouze 50–60 % pacientů na tato činidla reaguje. Aby se tyto výsledky zlepšily, musí se výzkumníci zabývat dvěma hlavními mezerami: omezeným pochopením klíčových událostí, které jsou základem patologické destrukce kosti, a nepřítomností biomarkerů pro predikci reakce na TNFa a identifikaci časných respondentů na TNF, aby se usnadnila optimalizace terapie.

Poškození kostí je zprostředkováno osteoklasty, které vznikají z prekurzorů monocytů v krvi. Prekurzory osteoklastů (OCPs) jsou dramaticky zvýšené u PsA ve srovnání s kontrolami, zejména u pacientů s poškozením kostí na rentgenovém snímku. Počet těchto cirkulačních prekurzorových buněk rychle poklesl po ošetření TFi. OCP mohou sloužit jako biomarkery odezvy, ale náklady, čas a vysoká variabilita tyto testy omezují. Prekurzory osteoklastů exprimují transmembránový protein specifický pro dendritické buňky (DC-STAMP), což je sedmiprůchodový transmembránový protein potřebný pro fúzi monocytů za vzniku osteoklastů a obřích buněk. Hladiny monocytů DC-STAMP po léčbě TNFi rychle klesly. Faktor 3 spojený s TNF receptorem (TRAF3), inhibitor tvorby OC, který koreluje s extracelulárními koncentracemi TNF, je u pacientů s PsA zvýšený v OCP. Tyto markery mohou předpovídat odpověď na léčbu TNF.

Cílem této studie je vyšetřit pacienty s psoriatickou artritidou před a po standardní biologické léčbě, jako je TNFi, a zároveň zkoumat expresi DC-STAMP a TRAF3 v průřezové analýze pacientů na stabilních látkách modifikujících orální onemocnění (DMARDS). a u pacientů ve stavu nízké aktivity onemocnění na terapii TNFi.

• Výzkumné testy:

Korelace mezi expresí TRAF3 a DC-STAMP na úrovni RNA a proteinu může být zkoumána u dvou pacientů s PsA na základní úrovni pomocí PCR v reálném čase, průtokové cytometrie a western po blokádě chlorochinu (CQ), která zabraňuje degradaci TRAF3. Buňky izolované z lidských PBMC mohou být sterilně tříděny před použitím v některých in vitro testech. Tříděné buňky mohou být ošetřeny CQ nebo MG132, inhibitorem proteazomu, v OC-podporujícím médiu v časovém průběhu a experimentech dávka-odpověď a OC se spočítají, aby se určilo, zda je DC-STAMP degradován lysozomem nebo proteazomem.

Mononukleované buňky periferní krve (PBMC) budou izolovány z krve centrifugací. Tyto buňky lze použít pro průtokovou cytometrii k analýze exprese TRAF3 a DC-STAMP na monocytech spolu s kvantifikací OC na začátku a/nebo přibližně po 4 měsících léčby. Povrchová exprese DC-STAMP na PBMC od pacientů s PsA korelovala s počtem OCP v kultuře a hladina DC-STAMP na monocytech CD14+ významně poklesla u pacientů s PsA po TNFi. Pokles DC-sTAMP+CD14+ buněk může sloužit jako měřítko časné odpovědi na TNF.