DC-STAMP & TRAF3: регуляторы остеокластогенеза и биомаркеры при ПсА (Incubator)

Псориатический артрит (ПсА), воспалительное заболевание суставов, связанное с псориазом (Пс), поражает примерно 650 000 взрослых в Соединенных Штатах и ​​связано с повышенной заболеваемостью и смертностью. Повреждение костей развивается у половины этих пациентов в течение первых двух лет болезни, часто приводя к нарушению функции и снижению качества жизни. Появление терапии против фактора некроза опухоли (TNFi) значительно улучшило клинический ответ и замедлило деградацию костей и хрящей у пациентов с ПсА, однако только 50-60% пациентов реагируют на эти препараты. Чтобы улучшить эти результаты, исследователи должны устранить два основных пробела: ограниченное понимание ключевых событий, лежащих в основе патологической деструкции кости, и отсутствие биомаркеров для прогнозирования реакции TNFi и выявления лиц, отвечающих на TNFi на ранней стадии, для облегчения оптимизации терапии.

Повреждение костей опосредовано остеокластами, которые возникают из предшественников моноцитов в крови. Предшественники остеокластов (OCP) резко повышены при ПсА по сравнению с контрольной группой, особенно у пациентов с повреждением кости на рентгенограмме. Количество этих циркулирующих клеток-предшественников быстро снижалось после обработки TNFi. КОК могут служить биомаркерами ответа, но стоимость, время и высокая вариабельность ограничивают эти анализы. Предшественники остеокластов экспрессируют трансмембранный белок, специфичный для дендритных клеток (DC-STAMP), который представляет собой трансмембранный белок семи проходов, необходимый для слияния моноцитов с образованием остеокластов и гигантских клеток. Уровни моноцитов DC-STAMP быстро снижались после лечения TNFi. Фактор 3, ассоциированный с рецептором TNF (TRAF3), ингибитор образования OC, который коррелирует с внеклеточной концентрацией TNF, повышен у пациентов с PsA. Эти маркеры могут предсказать ответ на лечение TNFi.

Целью этого исследования является обследование пациентов с псориатическим артритом до и после стандартного биологического лечения, такого как TNFi, а также изучение экспрессии DC-STAMP и TRAF3 в перекрестном анализе пациентов, получающих стабильные препараты, модифицирующие заболевания полости рта (DMARDS). и у пациентов в состоянии низкой активности заболевания на фоне терапии TNFi.

• Исследовательские анализы:

Корреляцию между экспрессией TRAF3 и DC-STAMP на уровне РНК и белка можно исследовать для двух исходных пациентов с ПсА с помощью ПЦР в реальном времени, проточной цитометрии и вестерн после блокады хлорохином (CQ), которая предотвращает деградацию TRAF3. Клетки, выделенные из РВМС человека, могут быть стерильно отсортированы перед использованием в некоторых анализах in vitro. Отсортированные клетки могут быть обработаны CQ или MG132, ингибитором протеасомы, в среде, стимулирующей OC, в экспериментах с течением времени и доза-реакция, а OC подсчитываются для определения того, расщепляется ли DC-STAMP лизосомой или протеасомой.

Мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) выделяют из крови центрифугированием. Эти клетки можно использовать для проточной цитометрии для анализа экспрессии TRAF3 и DC-STAMP на моноцитах наряду с количественной оценкой ОС на исходном уровне и/или примерно через 4 месяца лечения. Поверхностная экспрессия DC-STAMP на РВМС пациентов с ПсА коррелировала с количеством OCP в культуре, а уровень DC-STAMP на моноцитах CD14+ значительно снизился у пациентов с ПсА после TNFi. Снижение количества клеток DC-sTAMP+CD14+ может служить мерой раннего ответа на TNFi.