Vývoj testu pro biomarkery rakoviny

Potenciální účastníky osloví členové klinického nebo výzkumného týmu a zeptají se, zda by měli zájem se této studie zúčastnit. Účastnický informační list bude zpracován a prodiskutován s jednotlivci, zdůrazní jejich zapojení, rizika a přínosy tohoto výzkumu. Účast ve studii zejména nezmění žádné současné terapie dobrovolníků. Po ponechání dostatečného času na rozhodnutí budou potenciální účastníci požádáni, aby podepsali formulář souhlasu.

Po získání informovaného souhlasu budou dobrovolníci požádáni, aby pro naši studii darovali krev, moč, sputum (sliny) nebo jiné tělesné tekutiny, jako je bronchoalveolární laváž, a zároveň se provádějí další analýzy jako součást běžné lékařské péče jednotlivců. Pokud je již některým účastníkům naplánována nová léková terapie ve stávající studii, můžeme je požádat, aby přispěli malým množstvím krve, slin, moči nebo jiných tělesných tekutin dvakrát, před a po naprogramované léčbě. Vzorky budou odebírány současně s běžnými lékařskými prohlídkami účastníků.

Biologické vzorky budou odebírány a skladovány podle typu vzorku a specifikací testu; poté provedou členové výzkumného týmu separaci buněčných složek a rozpustných faktorů z kapalné části. Izolační techniky se budou lišit v závislosti na zdroji vzorku.

V závislosti na specifickém testu, který má být vyvinut, bude obsah proteinu analyzován průtokovou cytometrií, enzymem-linked immunoassay (ELISA) nebo jinými imunotesty, včetně technologie Luminex® založené na perličkách. Ve všech těchto laboratorních technikách umožňuje unikátní interakce mezi specifickou protilátkou a antigenem identifikaci jednoho nebo více cílových proteinů uvnitř komplexní proteinové směsi.

Průtoková cytometrie využívá fluorescenční vlastnosti některých barviv k hodnocení přítomnosti specifických markerů na povrchu nebo uvnitř zdravých nebo rakovinných buněk. To pomůže stanovit frekvenci specifických buněčných populací nebo intenzitu specifických markerů na buňkách. Stejně tak ELISA umožňuje kvalitativní a kvantitativní charakterizaci rozpustných látek; více cílových proteinů v suspenzi lze hodnotit postupem Luminex® ve stejném vzorku. Pro stanovení přítomnosti/absence proteinů umístěných buď na buněčném povrchu nebo intracelulárně mohou být použity jiné biochemické techniky, jako je imunoblotování.

Kromě proteinů lze biomolekulárními technikami hodnotit obsah nukleových kyselin, včetně DNA, RNA nebo mikroRNA.

Výzkumná data budou generována těmito laboratorními metodami jako softwarově specifické soubory, jako jsou standardní soubory průtokové cytometrie (FCS) pro výsledky průtokové cytometrie, obrázky a datové tabulky. Parametry jako citlivost, limit detekce a variabilita testu budou také vyhodnoceny a uvedeny v numerických tabulkách. Během vývoje testu budou data od zdravých dárců a pacientů s rakovinou porovnána se standardními statistickými balíčky, aby se vytvořily robustní testy, které dokážou rozlišit mezi těmito dvěma skupinami.