Sviluppo di analisi per i biomarcatori del cancro

I potenziali partecipanti saranno contattati dai membri del team clinico o di ricerca e gli verrà chiesto se sarebbero interessati a partecipare a questo studio. La scheda informativa del partecipante sarà gestita e discussa con le persone, evidenziando il loro coinvolgimento, rischio e beneficio di questa ricerca. In particolare, la partecipazione allo studio non altererà le attuali terapie dei volontari. Avendo lasciato tempo sufficiente per decidere, ai potenziali partecipanti verrà chiesto di firmare un modulo di consenso.

Dopo aver ottenuto il consenso informato, ai volontari verrà chiesto di donare sangue, urina, espettorato (saliva) o altri fluidi corporei, come il lavaggio broncoalveolare, per il nostro studio, allo stesso tempo vengono effettuate altre analisi come parte delle cure mediche abituali delle persone. Se alcuni partecipanti sono già programmati per ricevere una nuova terapia farmacologica in uno studio esistente, potremmo chiedere loro di contribuire con una piccola quantità di sangue, saliva, urina o altri fluidi corporei, due volte, prima e dopo il trattamento programmato. I campioni verranno raccolti contemporaneamente agli esami medici di routine dei partecipanti.

I campioni biologici saranno raccolti e conservati in base al tipo di campione e alle specifiche del test; quindi la separazione dei componenti cellulari e dei fattori solubili dalla parte liquida sarà eseguita dai membri del gruppo di ricerca. Le tecniche di isolamento variano in base alla fonte del campione.

A seconda del test specifico da sviluppare, il contenuto proteico sarà analizzato mediante citometria a flusso, test immunologico enzimatico (ELISA) o altri test immunologici, inclusa la tecnologia Luminex® basata su microsfere. In tutte queste tecniche di laboratorio, l'interazione unica tra un anticorpo specifico e un antigene consente l'identificazione di proteine ​​bersaglio singole o multiple all'interno di una miscela proteica complessa.

La citometria a flusso utilizza le proprietà di fluorescenza di alcuni coloranti per valutare la presenza di marcatori specifici sulla superficie o all'interno di cellule sane o cancerose. Ciò contribuirà a stabilire la frequenza di popolazioni cellulari specifiche o l'intensità di marcatori specifici sulle cellule. Allo stesso modo, ELISA consente la caratterizzazione qualitativa e quantitativa delle sostanze solubili; più proteine ​​bersaglio in sospensione possono essere valutate con la procedura Luminex® all'interno dello stesso campione. Altre tecniche biochimiche, come l'immunoblotting, possono essere utilizzate per determinare la presenza/assenza di proteine ​​localizzate sulla superficie cellulare o intracellulare.

Oltre alle proteine, è possibile valutare il contenuto di acido nucleico, inclusi DNA, RNA o microRNA mediante tecniche biomolecolari.

I dati di ricerca saranno generati da questi metodi di laboratorio come file specifici del software, come i file standard di citometria a flusso (FCS) per i risultati mediante citometria a flusso, immagini e tabelle di dati. Parametri come la sensibilità, il limite di rilevabilità e la variabilità del saggio saranno valutati e riportati in tabelle numeriche. Durante lo sviluppo del saggio, i dati di donatori sani e malati di cancro saranno confrontati con pacchetti statistici standard, al fine di stabilire test robusti in grado di discriminare tra i due gruppi.