Desenvolvimento de ensaios para biomarcadores de câncer

Os participantes em potencial serão abordados por membros da equipe clínica ou de pesquisa e perguntados se estariam interessados ​​em participar deste estudo. A Folha de Informações do Participante será manuseada e discutida com os indivíduos, destacando seu envolvimento, risco e benefício desta pesquisa. Em particular, a participação no estudo não alterará nenhuma terapia atual dos voluntários. Tendo deixado tempo suficiente para decidir, os potenciais participantes serão solicitados a assinar um Termo de Consentimento.

Após obter o consentimento informado, os voluntários serão solicitados a doar sangue, urina, escarro (saliva) ou outros fluidos corporais, como lavado broncoalveolar, para o nosso estudo, ao mesmo tempo em que outras análises são realizadas como parte dos cuidados médicos habituais dos indivíduos. Se alguns participantes já estiverem agendados para receber uma nova terapia medicamentosa em um estudo existente, podemos pedir que eles contribuam com uma pequena quantidade de sangue, saliva, urina ou outros fluidos corporais, duas vezes, antes e depois do tratamento programado. As amostras serão coletadas ao mesmo tempo em que os exames médicos de rotina dos participantes são realizados.

As amostras biológicas serão coletadas e armazenadas de acordo com o tipo de amostra e as especificações do teste; então a separação dos componentes celulares e fatores solúveis da parte líquida será realizada pelos membros da equipe de pesquisa. As técnicas de isolamento variam de acordo com a fonte da amostra.

Dependendo do ensaio específico a ser desenvolvido, o teor de proteínas será analisado por citometria de fluxo, imunoensaio enzimático (ELISA) ou outros imunoensaios, incluindo a tecnologia baseada em esferas Luminex®. Em todas essas técnicas de laboratório, a interação única entre um anticorpo específico e um antígeno permite a identificação de proteínas-alvo únicas ou múltiplas dentro de uma mistura complexa de proteínas.

A citometria de fluxo usa propriedades de fluorescência de alguns corantes para avaliar a presença de marcadores específicos na superfície ou dentro de células saudáveis ​​ou cancerígenas. Isso ajudará a estabelecer a frequência de populações de células específicas ou a intensidade de marcadores específicos nas células. Da mesma forma, o ELISA permite a caracterização qualitativa e quantitativa de substâncias solúveis; várias proteínas-alvo em suspensão podem ser avaliadas com o procedimento Luminex® dentro da mesma amostra. Outras técnicas bioquímicas, como imunotransferência, podem ser usadas para determinar a presença/ausência de proteínas localizadas na superfície celular ou intracelularmente.

Além das proteínas, pode-se avaliar o conteúdo de ácidos nucléicos, incluindo DNA, RNA ou microRNA por técnicas biomoleculares.

Os dados da pesquisa serão gerados por esses métodos laboratoriais como arquivos específicos de software, como arquivos padrão de citometria de fluxo (FCS) para resultados por citometria de fluxo, imagens e tabelas de dados. Parâmetros como sensibilidade, limite de detecção e variabilidade do ensaio também serão avaliados e relatados em tabelas numéricas. Durante o desenvolvimento do ensaio, dados de doadores saudáveis ​​e pacientes com câncer serão comparados com pacotes estatísticos padrão, a fim de estabelecer testes robustos que possam discriminar entre os dois grupos.