Desarrollo de ensayos para biomarcadores de cáncer

Miembros del equipo clínico o de investigación se acercarán a los participantes potenciales y les preguntarán si estarían interesados ​​en participar en este estudio. La Hoja de Información del Participante se manejará y discutirá con las personas, destacando su participación, el riesgo y el beneficio de esta investigación. En particular, la participación en el estudio no alterará las terapias actuales de los voluntarios. Habiendo dejado suficiente tiempo para decidir, se les pedirá a los participantes potenciales que firmen un Formulario de Consentimiento.

Después de obtener el consentimiento informado, se les pedirá a los voluntarios que donen sangre, orina, esputo (saliva) u otros fluidos corporales, como lavado broncoalveolar, para nuestro estudio, al mismo tiempo que se realizan otros análisis como parte de la atención médica habitual de los individuos. Si algunos participantes ya están programados para recibir una nueva terapia farmacológica en un ensayo existente, podemos pedirles que contribuyan con una pequeña cantidad de sangre, saliva, orina u otros fluidos corporales, dos veces, antes y después del tratamiento programado. Las muestras se recolectarán al mismo tiempo que se realizan los exámenes médicos de rutina de los participantes.

Las muestras biológicas se recolectarán y almacenarán de acuerdo con el tipo de muestra y las especificaciones de la prueba; luego, los miembros del equipo de investigación realizarán la separación de los componentes celulares y los factores solubles de la parte líquida. Las técnicas de aislamiento variarán según la fuente de la muestra.

Según el ensayo específico que se desarrolle, el contenido de proteínas se analizará mediante citometría de flujo, inmunoensayo ligado a enzimas (ELISA) u otros inmunoensayos, incluida la tecnología Luminex® basada en perlas. En todas estas técnicas de laboratorio, la interacción única entre un anticuerpo específico y un antígeno permite la identificación de proteínas diana únicas o múltiples dentro de una mezcla compleja de proteínas.

La citometría de flujo utiliza las propiedades de fluorescencia de algunos colorantes para evaluar la presencia de marcadores específicos en la superficie o en el interior de células sanas o cancerosas. Esto ayudará a establecer la frecuencia de poblaciones celulares específicas o la intensidad de marcadores específicos en las células. Asimismo, ELISA permite la caracterización cualitativa y cuantitativa de sustancias solubles; múltiples proteínas diana en suspensión pueden evaluarse con el procedimiento Luminex® dentro de la misma muestra. Se pueden usar otras técnicas bioquímicas, como la inmunotransferencia, para determinar la presencia/ausencia de proteínas ubicadas en la superficie celular o intracelularmente.

Además de las proteínas, se puede evaluar el contenido de ácidos nucleicos, incluidos el ADN, el ARN o el microARN, mediante técnicas biomoleculares.

Estos métodos de laboratorio generarán datos de investigación como archivos específicos de software, como archivos estándar de citometría de flujo (FCS) para resultados de citometría de flujo, imágenes y tablas de datos. Los parámetros como la sensibilidad, el límite de detección y la variabilidad del ensayo también se evaluarán e informarán en tablas numéricas. Durante el desarrollo del ensayo, los datos tanto de donantes sanos como de pacientes con cáncer se compararán con paquetes estadísticos estándar para establecer pruebas sólidas que puedan discriminar entre los dos grupos.