Assayudvikling for kræftbiomarkører

Potentielle deltagere vil blive kontaktet af medlemmer af kliniske eller forskningsteam og spurgt, om de ville være interesserede i at deltage i denne undersøgelse. Deltagerinformationsark vil blive håndteret og diskuteret med enkeltpersoner, hvilket fremhæver deres involvering, risiko og fordele ved denne forskning. Især vil deltagelse i undersøgelsen ikke ændre de frivilliges nuværende terapier. Efter at have efterladt tilstrækkelig tid til at beslutte sig, vil potentielle deltagere blive bedt om at underskrive en samtykkeerklæring.

Efter at have indhentet informeret samtykke, vil frivillige blive bedt om at donere blod, urin, sputum (spyt) eller andre kropsvæsker, såsom bronkoalveolær skylning, til vores undersøgelse, samtidig med at andre analyser udføres som en del af individers sædvanlige lægebehandling. Hvis nogle deltagere allerede er planlagt til at modtage en ny lægemiddelbehandling i et eksisterende forsøg, kan vi bede dem om at bidrage med en lille mængde blod, spyt, urin eller andre kropsvæsker, to gange før og efter den programmerede behandling. Der vil blive indsamlet prøver samtidig med, at deltagernes rutinemæssige lægeundersøgelser udføres.

Biologiske prøver vil blive indsamlet og opbevaret i henhold til prøvetype og testspecifikationer; derefter vil adskillelse af cellulære komponenter og opløselige faktorer fra flydende del blive udført af forskerteammedlemmer. Isoleringsteknikker vil variere baseret på prøvekilden.

Afhængigt af det specifikke assay, der skal udvikles, vil proteinindholdet blive analyseret ved flowcytometri, enzym-linked immunoassay (ELISA) eller andre immunoassays, herunder den perlebaserede Luminex®-teknologi. I alle disse laboratorieteknikker muliggør den unikke interaktion mellem et specifikt antistof og antigen identifikation af enkelte eller flere målproteiner inde i en kompleks proteinblanding.

Flowcytometri bruger fluorescensegenskaber af nogle farvestoffer til at evaluere tilstedeværelsen af ​​specifikke markører på overfladen eller inde i sunde eller kræftceller. Dette vil hjælpe med at etablere hyppigheden af ​​specifikke cellepopulationer eller intensiteten af ​​specifikke markører på cellerne. Ligeledes tillader ELISA kvalitativ og kvantitativ karakterisering af opløselige stoffer; flere målproteiner i suspension kan evalueres med Luminex®-proceduren inden for samme prøve. Andre biokemiske teknikker, såsom immunoblotting, kan anvendes til at bestemme tilstedeværelse/fravær af proteiner lokaliseret enten på celleoverfladen af ​​eller intracellulært.

Ud over proteiner kan nukleinsyreindhold vurderes, herunder DNA, RNA eller mikroRNA ved biomolekylære teknikker.

Forskningsdata vil blive genereret af disse laboratoriemetoder som software-specifikke filer, såsom flowcytometri standard (FCS) filer for resultater ved flowcytometri, billeder og datatabeller. Parametre som følsomhed, detektionsgrænse og analysevariabilitet vil også blive evalueret og rapporteret i numeriske tabeller. Under analyseudvikling vil data fra både raske donorer og cancerpatienter blive sammenlignet med standard statistiske pakker for at etablere robuste test, der kan skelne mellem de to grupper.