Assay-Entwicklung für Krebs-Biomarker

Potenzielle Teilnehmer werden von Mitgliedern des Klinik- oder Forschungsteams angesprochen und gefragt, ob sie an einer Teilnahme an dieser Studie interessiert wären. Das Teilnehmerinformationsblatt wird bearbeitet und mit Einzelpersonen besprochen, wobei deren Beteiligung, Risiko und Nutzen dieser Forschung hervorgehoben werden. Insbesondere werden sich durch die Teilnahme an der Studie keine aktuellen Therapien der Freiwilligen ändern. Nachdem genügend Zeit für die Entscheidung gelassen wurde, werden potenzielle Teilnehmer gebeten, eine Einverständniserklärung zu unterzeichnen.

Nach Einholung der Einverständniserklärung werden die Freiwilligen gebeten, für unsere Studie Blut, Urin, Sputum (Speichel) oder andere Körperflüssigkeiten wie bronchoalveoläre Lavage zu spenden. Gleichzeitig werden im Rahmen der üblichen medizinischen Versorgung des Einzelnen andere Analysen durchgeführt. Wenn für einige Teilnehmer bereits eine neuartige medikamentöse Therapie in einer bestehenden Studie vorgesehen ist, können wir sie bitten, vor und nach der geplanten Behandlung zweimal eine kleine Menge Blut, Speichel, Urin oder andere Körperflüssigkeiten abzugeben. Die Probenentnahme erfolgt gleichzeitig mit den routinemäßigen medizinischen Untersuchungen der Teilnehmer.

Biologische Proben werden entsprechend der Probenart und den Testspezifikationen gesammelt und gelagert; Anschließend werden die Mitglieder des Forschungsteams die Zellbestandteile und löslichen Faktoren vom flüssigen Teil trennen. Die Isolierungstechniken variieren je nach Probenquelle.

Abhängig von dem zu entwickelnden spezifischen Assay wird der Proteingehalt mittels Durchflusszytometrie, Enzymimmunoassay (ELISA) oder anderen Immunoassays, einschließlich der auf Perlen basierenden Luminex®-Technologie, analysiert. Bei all diesen Labortechniken ermöglicht die einzigartige Interaktion zwischen einem spezifischen Antikörper und einem Antigen die Identifizierung einzelner oder mehrerer Zielproteine ​​innerhalb einer komplexen Proteinmischung.

Die Durchflusszytometrie nutzt die Fluoreszenzeigenschaften einiger Farbstoffe, um das Vorhandensein spezifischer Marker auf der Oberfläche oder im Inneren gesunder oder krebsartiger Zellen zu bewerten. Dies wird dabei helfen, die Häufigkeit spezifischer Zellpopulationen oder die Intensität spezifischer Marker auf den Zellen festzustellen. Ebenso ermöglicht ELISA die qualitative und quantitative Charakterisierung löslicher Substanzen; Mehrere suspendierte Zielproteine ​​können mit dem Luminex®-Verfahren innerhalb derselben Probe bewertet werden. Andere biochemische Techniken wie Immunblotting können verwendet werden, um das Vorhandensein/Fehlen von Proteinen zu bestimmen, die sich entweder auf der Zelloberfläche oder intrazellulär befinden.

Zusätzlich zu Proteinen kann der Gehalt an Nukleinsäuren, einschließlich DNA, RNA oder microRNA, mithilfe biomolekularer Techniken beurteilt werden.

Forschungsdaten werden durch diese Labormethoden als softwarespezifische Dateien generiert, beispielsweise als Durchflusszytometrie-Standarddateien (FCS) für Ergebnisse der Durchflusszytometrie, Bilder und Datentabellen. Parameter wie Empfindlichkeit, Nachweisgrenze und Assay-Variabilität werden ebenfalls ausgewertet und in numerischen Tabellen angegeben. Während der Assay-Entwicklung werden Daten sowohl von gesunden Spendern als auch von Krebspatienten mit Standard-Statistikpaketen verglichen, um robuste Tests zu etablieren, die zwischen den beiden Gruppen unterscheiden können.