Detekce recidivujících mutací u Waldenströmovy choroby (DigiWAL)

Mutace L265P MYD88 se objevuje jako časná onkogenní událost při výskytu Waldenströmovy choroby a může být přítomna již ve stadiu monoklonální gamapatie neurčeného významu (MGUS) až IgM, což naznačuje kontinuitu mezi těmito dvěma stádii onemocnění. Stanovení IgM jako markeru onemocnění má své limity, protože neumožňuje přímou kvantifikaci klonální populace a v případě špatně secernujících forem se provádí jinak. Sledování L265P mutace MYD88 jako markeru minimální reziduální choroby se proto zdá být biomarkerem velkého zájmu u těchto chorob. Kinetika tohoto markeru zejména během léčby by mohla umožnit modifikaci terapeutického managementu pacientů v časném stadiu a posouzení rizika rezistence na léčbu.

Několik publikovaných studií ukazuje zájem o sledování mutace L265P MYD88 v MW, zejména kvantifikací mutace pomocí alelově specifické PCR. Studovaný detekční limit byl 0,1 %. Nedávný vývoj nových technik a zejména digitální PCR umožňuje získat nižší prahy detekce, které by mohly být více kompatibilní s představou minimálního monitorování reziduálního onemocnění.

Originalita této studie je založena na srovnání kvantifikace mutace MYD88 L265P ve všech postižených biologických kompartmentech (krev, plazma, kostní dřeň nebo buňky CD19+), ale především na sledování mutace ve dvou bodech minimální reziduální choroby ( uprostřed léčby a na konci léčby).

Jednou z částí projektu je studium alelické frekvence mutace L265P genu MYD88 v cirkulující nádorové DNA (ctDNA). U mnoha patologií a zejména u jiných B lymfocytárních hematologií, jako je Hodgkinův lymfom nebo difuzní velkobuněčný B lymfom, bylo prokázáno, že mutace přítomné na úrovni nádoru lze nalézt v cirkulující nádorové DNA. Analýzu volné nádorové DNA cirkulující v plazmě pacientů lze proto použít k charakterizaci onemocnění na molekulární úrovni s méně invazivním vzorkem než myelogram nebo biopsie kostní dřeně. Originalitu projektu posiluje i hledání dalších přidružených mutací. Tato kombinovaná data musí být schopna vést ke změnám v klinické léčbě pacientů.

V této studii bude porovnána frekvence alel mutace L265P MYD88. 3 různými technikami: specifická alelová PCR, digitální PCR a sekvenování nové generace. Tímto způsobem vyšetřovatelé vyhodnotí techniku, která má nejlepší senzitivitu a specificitu pro použití jako marker reziduální nemoci. Tato data budou porovnána s referenční technikou, proteinovou elektroforézou. Toto hodnocení bude provedeno v celkových mononukleárních buňkách, DNAct, dřeni a CD19+ tříděných buňkách. Poté budou výzkumníci sledovat kinetiku této mutace během léčby ve dvou bodech: uprostřed léčby a na konci léčby.

Charakterizace mutačního profilu těchto nádorů umožňuje definovat prognostické faktory a může identifikovat potenciální nové terapeutické cíle. Tato studie bude realizována sekvenováním nové generace. Budou studovány některé geny s mutacemi účastnícími se rezistence na léčbu, jako je CXCR4. Mutace CXCR4 se podílejí na rezistenci vůči ibrutinibu. Mutace ARID1A se také nacházejí ve 20 % případů, stejně jako mutace TP53, KMT2D, CD79B, MYBBP1A.