Nachweis wiederkehrender Mutationen bei der Waldenström-Krankheit (DigiWAL)

Die L265P-Mutation von MYD88 tritt als frühes onkogenes Ereignis beim Auftreten der Waldenström-Krankheit auf und kann bereits im Stadium der monoklonalen Gammapathie unbestimmter Signifikation (MGUS) bis zum IgM-Stadium vorhanden sein, was auf ein Kontinuum zwischen den beiden Krankheitsstadien hindeutet. Die Bestimmung von IgM als Marker der Krankheit hat Grenzen, da sie keine direkte Quantifizierung der Klonpopulation zulässt und bei schwach sezernierenden Formen fehlschlägt. Die Überwachung der L265P-Mutation von MYD88 als Marker einer minimalen Resterkrankung scheint daher ein Biomarker von großem Interesse bei diesen Erkrankungen zu sein. Die Kinetik dieses Markers insbesondere während der Behandlung könnte es ermöglichen, das therapeutische Management von Patienten in einem frühen Stadium zu modifizieren und das Risiko einer Behandlungsresistenz abzuschätzen.

Mehrere veröffentlichte Studien zeigen das Interesse an der Überwachung der L265P-Mutation von MYD88 in MW, insbesondere durch Quantifizierung der Mutation durch allelspezifische PCR. Die untersuchte Nachweisgrenze lag bei 0,1 %. Die jüngste Entwicklung neuer Techniken und insbesondere der digitalen PCR ermöglicht es, niedrigere Nachweisschwellenwerte zu erhalten, die besser mit dem Konzept der minimalen Restkrankheitsüberwachung vereinbar sein könnten.

Die Originalität dieser Studie basiert auf dem Vergleich der Quantifizierung der MYD88 L265P-Mutation in allen betroffenen biologischen Kompartimenten (Blut, Plasma, Knochenmark oder CD19+ Zellen), aber insbesondere in der Überwachung der Mutation an zwei Punkten minimaler Resterkrankung ( Mitte der Behandlung und Ende der Behandlung).

Einer der Teile des Projekts ist die Untersuchung der allelischen Häufigkeit der L265P-Mutation des MYD88-Gens in zirkulierender Tumor-DNA (ctDNA). Bei vielen Pathologien und insbesondere bei anderen B-lymphozytären Hämatologien wie dem Hodgkin-Lymphom oder dem diffusen großzelligen B-Lymphom wurde gezeigt, dass auf Tumorebene vorhandene Mutationen in zirkulierender Tumor-DNA gefunden werden können. Die Analyse von freier Tumor-DNA, die im Plasma von Patienten zirkuliert, kann daher verwendet werden, um die Krankheit auf molekularer Ebene mit einer weniger invasiven Probe als Myelogramm- oder Knochenmarkbiopsien zu charakterisieren. Die Suche nach anderen assoziierten Mutationen verstärkt auch die Originalität des Projekts. Diese kombinierten Daten müssen in der Lage sein, zu Änderungen in der klinischen Behandlung von Patienten zu führen.

In dieser Studie wird die Allelhäufigkeit der L265P-Mutation von MYD88 verglichen . durch 3 verschiedene Techniken: spezifische Allel-PCR, digitale PCR und Sequenzierung der neuen Generation. Auf diese Weise evaluieren die Prüfärzte die Technik, die die beste Sensitivität und Spezifität aufweist, um als Marker für Resterkrankungen verwendet zu werden. Diese Daten werden mit der Referenztechnik, der Proteinelektrophorese, verglichen. Diese Bewertung wird an mononukleären Gesamtzellen, DNAct-, Mark- und CD19+-sortierten Zellen durchgeführt. Dann werden die Forscher die Kinetik dieser Mutation während der Behandlung zu zwei Zeitpunkten verfolgen: während der Behandlung und am Ende der Behandlung.

Die Charakterisierung des Mutationsprofils dieser Tumore ermöglicht die Definition prognostischer Faktoren und kann potenzielle neue therapeutische Ziele identifizieren. Diese Studie wird durch New Generation Sequencing realisiert. Einige der Gene mit Mutationen, die an der Behandlungsresistenz beteiligt sind, werden untersucht, wie z. B. CXCR4. Die Mutationen von CXCR4 sind an der Resistenz gegen Ibrutinib beteiligt. ARID1A-Mutationen werden ebenfalls in 20 % der Fälle gefunden sowie TP53-, KMT2D-, CD79B-, MYBBP1A-Mutationen.