Detecção de Mutações Recorrentes na Doença de Waldenström (DigiWAL)

A mutação L265P de MYD88 aparece como um evento oncogênico precoce na ocorrência da doença de Waldenström e pode já estar presente no estágio de Gamapatia Monoclonal de Significado Indeterminado (MGUS) a IgM sugerindo um continuum entre os dois estágios da doença. A determinação de IgM como marcador da doença tem limites, uma vez que não permite a quantificação direta da população clonal e é tomada com falha no caso de formas pouco secretoras. Monitorar a mutação L265P de MYD88 como um marcador de doença residual mínima, portanto, parece ser um biomarcador de grande interesse nessas doenças. A cinética deste marcador, particularmente durante o tratamento, pode permitir modificar a gestão terapêutica dos doentes numa fase precoce e avaliar o risco de resistência ao tratamento.

Vários estudos publicados mostram o interesse de monitorar a mutação L265P de MYD88 em MW, em particular pela quantificação da mutação por PCR alelo-específico. O limite de detecção estudado foi de 0,1%. O desenvolvimento recente de novas técnicas e em particular a PCR digital permite obter limiares de detecção mais baixos que podem ser mais compatíveis com a noção de monitorização mínima da doença residual.

A originalidade deste estudo assenta na comparação da quantificação da mutação MYD88 L265P em todos os compartimentos biológicos afetados (sangue, plasma, medula óssea ou células CD19+) mas sobretudo na monitorização da mutação em dois pontos de doença residual mínima ( meio do tratamento e no final do tratamento).

Uma das partes do projeto é o estudo da frequência alélica da mutação L265P do gene MYD88 no DNA tumoral circulante (ctDNA). Foi demonstrado em muitas patologias e em particular em outras hematologias linfocíticas B, como linfoma de Hodgkin ou linfoma B difuso de grandes células, que mutações presentes no nível do tumor podem ser encontradas no DNA tumoral circulante. A análise do DNA tumoral livre circulando no plasma dos pacientes pode, portanto, ser usada para caracterizar a doença no nível molecular com uma amostra menos invasiva do que o mielograma ou as biópsias de medula óssea. A procura de outras mutações associadas também reforça a originalidade do projeto. Esses dados combinados devem ser capazes de levar a mudanças no manejo clínico dos pacientes.

Neste estudo, a frequência alélica da mutação L265P de MYD88 será comparada. por 3 técnicas diferentes: PCR de alelos específicos, PCR digital e sequenciamento de nova geração. Dessa forma, os investigadores avaliarão a técnica que tiver melhor sensibilidade e especificidade para ser usada como marcador de doença residual. Esses dados serão comparados com a técnica de referência, eletroforese de proteínas. Esta avaliação será realizada em células mononucleares totais, DNAct, medula e células selecionadas CD19+. Em seguida, os investigadores acompanharão a cinética dessa mutação durante o tratamento em dois pontos: meio-tratamento e final do tratamento.

A caracterização do perfil de mutações desses tumores permite definir fatores prognósticos e pode identificar potenciais novos alvos terapêuticos. Este estudo será realizado por sequenciamento de nova geração. Alguns dos genes com mutações envolvidas na resistência ao tratamento serão estudados, como o CXCR4. As mutações do CXCR4 estão envolvidas na resistência ao ibrutinibe. Mutações ARID1A também são encontradas em 20% dos casos, bem como mutações TP53, KMT2D, CD79B, MYBBP1A.