Wykrywanie nawracających mutacji w chorobie Waldenströma (DigiWAL)

Mutacja L265P MYD88 pojawia się jako wczesne zdarzenie onkogenne w występowaniu choroby Waldenströma i może już być obecna na etapie gammapatii monoklonalnej o nieokreślonym znaczeniu (MGUS) do etapu IgM, co sugeruje kontinuum między dwoma stadiami choroby. Oznaczanie IgM jako markera choroby ma ograniczenia, ponieważ nie pozwala na bezpośrednie ilościowe określenie populacji klonów i jest przyjmowane w przypadku form słabo wydzielających. Monitorowanie mutacji L265P MYD88 jako markera minimalnej choroby resztkowej wydaje się zatem być biomarkerem o dużym znaczeniu w tych chorobach. Kinetyka tego markera, szczególnie w trakcie leczenia, mogłaby pozwolić na modyfikację postępowania terapeutycznego pacjentów we wczesnym stadium oraz ocenę ryzyka wystąpienia oporności na leczenie.

Kilka opublikowanych badań wskazuje na zainteresowanie monitorowaniem mutacji L265P MYD88 w MW, w szczególności poprzez ilościową ocenę mutacji przez PCR specyficzny dla allelu. Badana granica wykrywalności wynosiła 0,1%. Niedawny rozwój nowych technik, w szczególności cyfrowej PCR, umożliwia uzyskanie niższych progów wykrywalności, które mogłyby być bardziej zgodne z koncepcją minimalnego monitorowania choroby resztkowej.

Oryginalność tego badania opiera się na porównaniu oceny ilościowej mutacji MYD88 L265P we wszystkich dotkniętych przedziałach biologicznych (krew, osocze, szpik kostny lub komórki CD19+), ale przede wszystkim na monitorowaniu mutacji w dwóch punktach minimalnej choroby resztkowej ( w trakcie i na końcu leczenia).

Jednym z elementów projektu jest badanie częstości allelicznej mutacji L265P genu MYD88 w krążącym DNA nowotworu (ctDNA). W wielu patologiach, aw szczególności w innych hematologiach limfocytów B, takich jak chłoniak Hodgkina lub rozlany chłoniak z dużych komórek B, wykazano, że mutacje obecne na poziomie guza można znaleźć w krążącym DNA nowotworu. Analiza wolnego DNA guza krążącego w osoczu pacjentów może być zatem wykorzystana do scharakteryzowania choroby na poziomie molekularnym za pomocą mniej inwazyjnej próbki niż mielogram lub biopsje szpiku kostnego. Poszukiwanie innych powiązanych mutacji również wzmacnia oryginalność projektu. Te połączone dane muszą być w stanie doprowadzić do zmian w leczeniu klinicznym pacjentów.

W tym badaniu porównana zostanie częstość alleli mutacji L265P MYD88. 3 różnymi technikami: specyficzną allelową PCR, cyfrową PCR i sekwencjonowaniem nowej generacji. W ten sposób badacze ocenią technikę, która ma najlepszą czułość i swoistość do zastosowania jako marker choroby resztkowej. Dane te zostaną porównane z techniką referencyjną, elektroforezą białek. Ta ocena zostanie przeprowadzona na całkowitych komórkach jednojądrzastych, komórkach DNAct, szpiku i posortowanych komórkach CD19+. Następnie badacze będą śledzić kinetykę tej mutacji podczas leczenia w dwóch punktach: w połowie leczenia i na końcu leczenia.

Charakterystyka profilu mutacji tych nowotworów pozwala na określenie czynników prognostycznych i może zidentyfikować potencjalne nowe cele terapeutyczne. Badanie to zostanie zrealizowane za pomocą sekwencjonowania nowej generacji. Zbadane zostaną niektóre geny z mutacjami związanymi z opornością na leczenie, takie jak CXCR4. Mutacje CXCR4 są zaangażowane w oporność na ibrutynib. Mutacje ARID1A występują również w 20% przypadków, podobnie jak mutacje TP53, KMT2D, CD79B, MYBBP1A.