Rilevazione di mutazioni ricorrenti nella malattia di Waldenström (DigiWAL)

La mutazione L265P di MYD88 appare come un evento oncogenico precoce nell'insorgenza della malattia di Waldenström e potrebbe già essere presente allo stadio da gammapatia monoclonale di significato indeterminato (MGUS) a IgM, suggerendo un continuum tra i due stadi della malattia. La determinazione delle IgM come marcatore di malattia ha dei limiti in quanto non consente la quantificazione diretta della popolazione clonale e viene presa in difetto nel caso di forme scarsamente secernenti. Il monitoraggio della mutazione L265P di MYD88 come marcatore di malattia residua minima sembra quindi essere un biomarcatore di grande interesse in queste malattie. La cinetica di questo marcatore, in particolare durante il trattamento, potrebbe consentire di modificare la gestione terapeutica dei pazienti in una fase precoce e di valutare il rischio di resistenza al trattamento.

Diversi studi pubblicati mostrano l'interesse di monitorare la mutazione L265P di MYD88 in MW in particolare mediante la quantificazione della mutazione mediante PCR allele-specifica. Il limite di rilevabilità studiato era dello 0,1%. Il recente sviluppo di nuove tecniche e in particolare la PCR digitale consente di ottenere soglie di rilevamento più basse che potrebbero essere più compatibili con la nozione di monitoraggio minimo di malattia residua.

L'originalità di questo studio si basa sul confronto della quantificazione della mutazione MYD88 L265P in tutti i compartimenti biologici interessati (sangue, plasma, midollo osseo o cellule CD19+) ma soprattutto nel monitoraggio della mutazione in due punti di minima malattia residua ( metà trattamento e fine trattamento).

Una delle parti del progetto è lo studio della frequenza allelica della mutazione L265P del gene MYD88 nel DNA tumorale circolante (ctDNA). È stato dimostrato in molte patologie e in particolare in altre ematologie linfocitarie B come il linfoma di Hodgkin o il linfoma B diffuso a grandi cellule, che mutazioni presenti a livello tumorale potrebbero essere riscontrate nel DNA tumorale circolante. L'analisi del DNA tumorale libero circolante nel plasma dei pazienti può quindi essere utilizzata per caratterizzare la malattia a livello molecolare con un campione meno invasivo rispetto al mielogramma o alle biopsie del midollo osseo. La ricerca di altre mutazioni associate rafforza anche l'originalità del progetto. Questi dati combinati devono essere in grado di portare a cambiamenti nella gestione clinica dei pazienti.

In questo studio verrà confrontata la frequenza allelica della mutazione L265P di MYD88. mediante 3 diverse tecniche: PCR per alleli specifici, PCR digitale e sequenziamento di nuova generazione. In questo modo, gli investigatori valuteranno la tecnica che ha la migliore sensibilità e specificità da utilizzare come marker per la malattia residua. Questi dati saranno confrontati con la tecnica di riferimento, l'elettroforesi proteica. Questa valutazione sarà condotta su cellule mononucleate totali, DNAct, midollo e cellule selezionate CD19+. Quindi, gli investigatori seguiranno la cinetica di questa mutazione durante il trattamento in due punti: metà trattamento e fine trattamento.

La caratterizzazione del profilo mutazionale di questi tumori consente di definire i fattori prognostici e può identificare potenziali nuovi bersagli terapeutici. Questo studio sarà realizzato mediante sequenziamento di nuova generazione. Verranno studiati alcuni dei geni con mutazioni coinvolte nella resistenza al trattamento come CXCR4. Le mutazioni di CXCR4 sono coinvolte nella resistenza a ibrutinib. Mutazioni ARID1A si trovano anche nel 20% dei casi così come mutazioni TP53, KMT2D, CD79B, MYBBP1A.