Nový parametr LIT/N, který předpovídá přežití u pacientů na JIP COVID-19

Detailní popis:

Je známo, že infekce COVID-19 spouští multisystémové zánětlivé onemocnění, které může vést ke spektru klinických příznaků (Dhama et al. 2020). Přibližně 20 % pacientů vykazuje akutní multisystémové selhání, včetně ARDS, doprovázené intenzivním zánětlivým procesem, který je život ohrožující (Wang et al. 2020; Wu et al. 2020; Yang et al. 2020). U závažného onemocnění COVID-19 však počet lymfocytů postupně klesá, zatímco počet neutrofilů se postupně zvyšuje (Li et al. 2020). K dnešnímu dni čtyři metaanalýzy uvádějí, že pacienti s těžkou infekcí COVID-19 mají vyšší NLR než pacienti s nezávažnou infekcí COVID-19 (Zheng et al. 2020, Chan & Rout. 2020; Ghahramani a kol. 2020; Lagunas-Rangel a kol. 2020). Neexistuje žádná absolutní hlášená objektivní prahová hladina pro případ, kdy NLR progreduje z téměř normálního stavu přes střední až k těžké.

Neutrofily fungují pomocí řady různých mechanismů včetně chemotaxe, fagocytózy, uvolňování reaktivních forem kyslíku (ROS) a granulárních proteinů a produkce a uvolňování cytokinů (Selder et al. 2017; Hellebrekers et al. 2018). Neutrofily podléhají složité environmentální regulaci, což může vést k významným rozdílům v produkci ROS (Panday et al. 2015 a Nguyen et al. 2017). Veenith a všichni již dříve prokázali, že produkce ROS u COVID-19 je dysfunkční (Veenith a kol. 2022, proces publikování). Navzdory obrovskému množství studií poskytujících důkazy o dysregulované in vivo vrozené imunitní odpovědi u některých pacientů s COVID-19 se ukázalo, že měření zachované funkční kapacity leukocytů (především neutrofilů) produkovat ROS v reakci na forbol-12-myristát- 13-acetát (PMA) ve vzorcích plné krve by mohl poskytnout rychlou 10minutovou metodu detekce pro objektivní určení nástupu nebo výskytu závažného onemocnění COVID-19 a sledování progrese a léčby onemocnění COVID-19. Prediktivní matematický model by pomohl včasné diagnostice a léčbě COVID-19 a umožnil by lékařům stanovit priority pacientů. Proto analýza produkce ROS v reakci na PMA u pneumonie COVID-19 srovnání se zdravými subjekty může odhalit tuto hypotézu.

Metoda:

Studie byla provedena se souhlasem etické komise v nemocnici na jednotce intenzivní péče (JIP). Populace pacientů se skládala z pacientů, kteří byli přijati na JIP kvůli zápalu plic COVID-19; zdravou dobrovolnickou populaci tvořili zdravotničtí pracovníci z nemocnice. Analýza byla prováděna na klinických vzorcích nebo pomocí testu vpichem do prstu od zdravých dobrovolníků. Produkce ROS v reakci na PMA byla analyzována do 30 minut od odběru. Diagnóza stavu COVID byla potvrzena pomocí testu polymerázové řetězové reakce (PCR). Společně s řadou konvenčních hematologických testů a klinických pozorování byl LIT test prováděn každý den nebo obden až do smrti nebo propuštění z JIP.

Sběr dat:

Pacienti byli sledováni od jejich přijetí na JIP až do dne odchodu nebo propuštění z JIP. Všechna data byla prospektivně shromážděna na standardizovaných formulářích studií. Datové proměnné shromážděné při přijetí zahrnovaly demografické charakteristiky, diagnózu, komorbidity, datum pozitivity PCR testu, příznaky COVID-19, závažnost COVID-19 (podle klasifikace Světové zdravotnické organizace (WHO), typ léčby, použití ventilace a ventilační typ, poměr parciální arteriální tlak kyslíku/vdechovaná kyslíková frakce (PaO2/FiO2), užívání antibiotik, C reaktivní protein (CRP), počet neutrofilů, celkový počet leukocytů. Při přijetí byla hodnocena závažnost pacienta pomocí APACHE II a skóre závažnosti orgánového selhání (SOFA). Během pobytu na JIP byli pacienti hodnoceni na rozvoj sepse nebo septického šoku. Rovněž byly zaznamenány vitální funkce v den provedení LIT testu. Hodnotily se také výsledné parametry jednotky intenzivní péče, jako je délka umělé ventilace, délka pobytu na JIP, délka hospitalizace a mortalita. CRP, počet neutrofilů a celkový počet leukocytů byly provedeny v den, kdy byl proveden LIT test u zdravých dobrovolníků.

Měření produkce ROS luminometrem:

Produkce ROS byla měřena podle výše popsané metody [25-27]. Stručně, 10 ul vzorků čerstvě získané krve (získané píchnutím do prstu nebo venepunkcí) bylo přidáno do 100 mikrolitrů fosfátem pufrovaného fyziologického roztoku (PBS) obsahujícího forbol 12-myristát 13-acetát (PMA; Sigma) a luminol. Roztok byl inkubován po dobu 10 minut při 37,5 °C. Chemiluminiscence byla kvantifikována po 10 minutách pomocí 3MTM ručního luminometru (Clean-Trace, NG3) v ​​relativních světelných jednotkách (RLU). Skóre LIT jako korelát funkce neutrofilů pro každého pacienta (vzorkování každý den nebo každý druhý den) a každého zdravého dobrovolníka (vzorek pouze jednou) bylo vyneseno do grafu.

Abnormálně vysoká (hyperprodukce) nebo nízká (hypoprodukce) generace ROS byla spojena s nepříznivými klinickými výsledky. To zvyšuje možnost použití LIT™/poměr počtu neutrofilů (LIT/N) jako prediktivního klinického nástroje.