Новый параметр LIT/N, предсказывающий выживаемость пациентов с COVID-19 в отделении интенсивной терапии

Подробное описание:

Известно, что инфекция COVID-19 вызывает мультисистемное воспалительное заболевание, которое может привести к спектру клинических симптомов (Dhama et al. 2020). Приблизительно у 20% пациентов наблюдается острая полисистемная недостаточность, в том числе ОРДС, сопровождающаяся интенсивным воспалительным процессом, опасным для жизни (Wang et al., 2020; Wu et al., 2020; Yang et al., 2020). Однако при тяжелом течении COVID-19 количество лимфоцитов постепенно снижается, а количество нейтрофилов постепенно увеличивается (Li et al. 2020). На сегодняшний день четыре метаанализа показали, что у пациентов с тяжелой инфекцией COVID-19 NLR выше, чем у пациентов с нетяжелой инфекцией COVID-19 (Zheng et al. 2020, Chan & Rout. 2020; Гахрамани и др. 2020; Лагунас-Рангел и др. 2020). Не существует абсолютного объективного порогового уровня, когда NLR прогрессирует от почти нормального до умеренного до тяжелого.

Нейтрофилы действуют с использованием ряда различных механизмов, включая хемотаксис, фагоцитоз, высвобождение активных форм кислорода (АФК) и зернистых белков, а также выработку и высвобождение цитокинов (Selder et al. 2017; Hellebrekers et al. 2018). Нейтрофилы подвергаются сложной регуляции окружающей среды, и это может привести к значительным различиям в продукции АФК (Panday et al. 2015 и Nguyen et al. 2017). Veenith и другие ранее продемонстрировали, что выработка АФК при COVID-19 нарушена (Veenith et al 2022, процесс публикации). Несмотря на огромное количество исследований, свидетельствующих о нарушении регуляции врожденного иммунного ответа in vivo у некоторых пациентов с COVID-19, стало очевидным, что измерение сохраненной функциональной способности лейкоцитов (в первую очередь нейтрофилов) продуцировать АФК в ответ на форбол-12-миристат- 13-ацетат (PMA) в образцах цельной крови может обеспечить быстрый 10-минутный метод обнаружения для объективного определения начала или возникновения тяжелой формы COVID-19 и мониторинга прогрессирования и лечения COVID-19. Прогностическая математическая модель поможет ранней диагностике и лечению COVID-19 и позволит клиницистам расставлять приоритеты у пациентов. Поэтому анализ продукции АФК в ответ на ПМА при пневмонии COVID-19 по сравнению со здоровыми субъектами может выявить эту гипотезу.

Метод:

Исследование было проведено с одобрения этического комитета в больнице отделения интенсивной терапии (ОИТ). Популяция пациентов состояла из пациентов, поступивших в отделение интенсивной терапии по поводу пневмонии, вызванной COVID-19; здоровое добровольческое население состояло из медицинских работников больницы. Анализ проводился на клинических образцах или путем взятия проб из пальца здоровых добровольцев. Продукцию АФК в ответ на ФМА анализировали в течение 30 минут после сбора. Диагноз COVID-статуса был подтвержден с помощью теста полимеразной цепной реакции (ПЦР). Вместе с рядом обычных гематологических тестов и клинических наблюдений тест LIT проводился каждый день или через день до смерти или выписки из отделения интенсивной терапии.

Сбор данных:

За пациентами наблюдали с момента их поступления в отделение интенсивной терапии до дня выхода или выписки из отделения интенсивной терапии. Все данные были проспективно собраны в стандартизированных формах исследования. Переменные данных, собранные при поступлении, включали демографические характеристики, диагноз, сопутствующие заболевания, дату положительного результата ПЦР-теста, симптомы COVID-19, тяжесть течения COVID-19 (по классификации Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ)), тип лечения, использование вентиляции. и тип вентиляции, соотношение парциальное артериальное давление кислорода/фракция вдыхаемого кислорода (PaO2/FiO2), использование антибиотиков, С-реактивный белок (СРБ), количество нейтрофилов, общее количество лейкоцитов. При поступлении тяжесть состояния пациента оценивалась по шкале APACHE II и по шкале оценки тяжести органной недостаточности (SOFA). Во время пребывания в отделении интенсивной терапии пациентов оценивали на предмет развития сепсиса или септического шока. Также регистрировались жизненные показатели в день проведения ЛИТ-теста. Также оценивались исходные параметры отделения интенсивной терапии, такие как продолжительность искусственной вентиляции легких, продолжительность пребывания в отделении интенсивной терапии, продолжительность госпитализации и смертность. СРБ, количество нейтрофилов и общее количество лейкоцитов определяли в день проведения ЛИТ-теста у здоровых добровольцев.

Измерения продукции АФК люминометром:

Продукцию АФК измеряли в соответствии с ранее описанным методом [25-27]. Вкратце, 10 мкл образцов свежеполученной крови (полученной путем прокола пальца или венепункции) добавляли к 100 мкл фосфатно-солевого буфера (PBS), содержащего форбол-12-миристат-13-ацетат (PMA; Sigma) и люминол. Раствор инкубировали в течение 10 минут при 37,5°С. Хемилюминесценцию количественно определяли через 10 минут с использованием ручного люминометра 3MTM (Clean-Trace, NG3) в относительных световых единицах (RLU). Наносили на график показатели LIT как коррелят функции нейтрофилов для каждого пациента (отбор проб каждый день или через день) и каждого здорового добровольца (отбор проб только один раз).

Аномально высокое (гиперпродукция) или низкое (гипопродукция) образование АФК было связано с неблагоприятными клиническими исходами. Это повышает вероятность использования отношения LIT™/количества нейтрофилов (LIT/N) в качестве прогностического клинического инструмента.