Egy új LIT/N paraméter, amely előrejelzi a túlélést a COVID-19 intenzív osztályos betegeknél

Részletes leírás:

Ismeretes, hogy a COVID-19 fertőzés több rendszerű gyulladásos rendellenességet vált ki, amely számos klinikai tünethez vezethet (Dhama et al. 2020). A betegek körülbelül 20%-ánál jelentkezik akut többrendszerű kudarc, beleértve az ARDS-t is, amelyet intenzív gyulladásos folyamat kísér, ami életveszélyes (Wang et al. 2020; Wu et al. 2020; Yang et al. 2020). Súlyos COVID-19 esetén azonban a limfocitaszám fokozatosan csökken, míg a neutrofilek száma fokozatosan növekszik (Li et al. 2020). Eddig négy metaanalízis számolt be arról, hogy a súlyos COVID-19 fertőzésben szenvedő betegek NLR-je magasabb, mint a nem súlyos COVID-19 fertőzésben szenvedőknél (Zheng et al. 2020, Chan & Rout. 2020; Ghahramani et al. 2020; Lagunas-Rangel et al. 2020). Nincs jelentett abszolút objektív küszöbszint arra vonatkozóan, amikor az NLR a közel normálistól a közepesen súlyosig terjed.

A neutrofilek számos különböző mechanizmussal működnek, beleértve a kemotaxist, a fagocitózist, a reaktív oxigénfajták (ROS) és a szemcsés fehérjék felszabadulását, valamint a citokinek termelését és felszabadulását (Selder és mtsai. 2017; Hellebrekers és mtsai. 2018). A neutrofilek komplex környezeti szabályozásnak vannak kitéve, és ez jelentős eltéréseket eredményezhet a ROS termelésében (Panday et al. 2015 és Nguyen et al. 2017). Veenith és mások már korábban bebizonyították, hogy a ROS-termelés a COVID-19-ben nem működik (Veenith et al 2022, közzétételi folyamat). Annak ellenére, hogy számos tanulmány bizonyította, hogy egyes COVID-19-betegeknél szabályozatlan in vivo veleszületett immunválasz alakult ki, nyilvánvalóvá vált, hogy a leukociták (elsősorban a neutrofilek) megőrzött funkcionális kapacitásának mérése ROS termelésére a forbol-12-mirisztát hatására. A teljes vérmintákban található 13-acetát (PMA) gyors, 10 perces kimutatási módszert biztosíthat a súlyos COVID-19 kezdetének vagy előfordulásának objektív meghatározására, valamint a COVID-19 progressziójának és kezelésének nyomon követésére. Egy prediktív matematikai modell segítené a COVID-19 korai diagnosztizálását és kezelését, és lehetővé tenné a klinikusok számára, hogy prioritást állítsanak fel a betegek számára. Ezért a COVID-19 tüdőgyulladásban a PMA-ra adott válasz ROS-termelésének elemzése egészséges alanyokkal összehasonlítva feltárhatja ezt a hipotézist.

Módszer:

A vizsgálatot etikai bizottság jóváhagyásával végezték az Intenzív Terápiás Osztály (ICU) Kórházában. A betegpopuláció olyan betegekből állt, akik COVID-19 tüdőgyulladás miatt kerültek intenzív osztályra; az egészséges önkéntes populáció a kórház egészségügyi dolgozóiból állt. Az elemzést klinikai mintákon vagy egészséges önkéntesek ujjszúrási vizsgálatával végezték. A PMA-ra adott ROS-termelést a begyűjtést követő 30 percen belül elemeztük. A COVID-státusz diagnózisát polimeráz láncreakció (PCR) teszttel erősítették meg. A hagyományos hematológiai tesztekkel és klinikai megfigyelésekkel együtt az LIT-tesztet minden nap vagy minden második napon elvégezték a halálig vagy az intenzív osztályról való elbocsátásig.

Adatgyűjtés:

A betegeket az intenzív osztályra való felvételüktől a kilépés vagy az intenzív osztályból való elbocsátás napjáig követték. Minden adatot prospektíven gyűjtöttünk szabványosított vizsgálati űrlapokon. A felvételkor gyűjtött adatváltozók a következők voltak: demográfiai jellemzők, diagnózis, társbetegségek, a PCR teszt pozitivitás időpontja, a COVID-19 tünetei, a COVID-19 súlyossága (az Egészségügyi Világszervezet (WHO) besorolása szerint), a kezelés típusa, a lélegeztetés használata és lélegeztetés típusa, parciális artériás oxigénnyomás/inspirált oxigénfrakció (PaO2/FiO2) arány, antibiotikumok alkalmazása, C-reaktív fehérje (CRP), neutrofilszám, teljes leukocitaszám. Felvételkor a beteg súlyosságát APACHE II és szervi elégtelenség értékelési (SOFA) pontszámmal értékelték. Az intenzív osztályon való tartózkodás során a betegeket szepszis vagy szeptikus sokk kialakulására értékelték. Az LIT vizsgálat napján az életjeleket is rögzítettük. Az intenzív osztály kimeneti paramétereit, például a gépi lélegeztetés időtartamát, az intenzív osztályon való tartózkodás időtartamát, a kórházi kezelés időtartamát és a mortalitást is értékelték. A CRP-t, a neutrofilszámot és a teljes leukocitaszámot az egészséges önkéntesek LIT-tesztjének napján végeztük el.

ROS termelés mérése luminométerrel:

A ROS termelést a korábban leírt módszer szerint mértük [25-27]. Röviden, 10 μl frissen vett vérmintát (ujjszúrással vagy vénapunkcióval) adtunk 100 mikroliter foszfáttal pufferolt sóoldathoz (PBS), amely forbol-12-mirisztát-13-acetátot (PMA; Sigma) és luminolt tartalmazott. Az oldatot 10 percig 37,5 °C-on inkubáltuk. A kemilumineszcenciát 10 perc elteltével 3MTM kézi luminométerrel (Clean-Trace, NG3) határoztuk meg relatív fényegységekben (RLU). A LIT-pontszámokat a neutrofil funkció korrelációjaként minden egyes betegnél (mindennap vagy minden második napon mintavétellel) és minden egészséges önkéntesnél (csak egyszer vettük minta) ábrázoltuk.

A rendellenesen magas (hiperprodukció) vagy alacsony (hipoprodukciós) ROS-képződés nemkívánatos klinikai eredménnyel járt. Ez felveti annak lehetőségét, hogy a LIT™/neutrofilszám arány (LIT/N) prediktív klinikai eszközként kerüljön felhasználásra.