Um novo parâmetro LIT/N que prevê a sobrevivência em pacientes de UTI com COVID-19

Descrição detalhada:

Sabe-se que a infecção por COVID-19 desencadeia um distúrbio inflamatório multissistêmico que pode levar a um espectro de sintomas clínicos (Dhama et al. 2020). Aproximadamente 20% dos pacientes apresentam insuficiência multissistêmica aguda, incluindo ARDS, acompanhada por um processo inflamatório intenso, que é fatal (Wang et al. 2020; Wu et al. 2020; Yang et al. 2020). No entanto, no COVID-19 grave, a contagem de linfócitos diminui progressivamente, enquanto a contagem de neutrófilos aumenta gradualmente (Li et al. 2020). Até o momento, quatro metanálises relataram que pacientes com infecção grave por COVID-19 têm NLR mais alta do que aqueles com infecção não grave por COVID-19 (Zheng et al. 2020, Chan & Rout. 2020; Ghahramani et al. 2020; Lagunas-Rangel et al. 2020). Não há nível de limiar objetivo absoluto relatado para quando a NLR progride de quase normal a moderada a grave.

Os neutrófilos operam usando vários mecanismos diferentes, incluindo quimiotaxia, fagocitose, liberação de espécies reativas de oxigênio (ROS) e proteínas granulares e a produção e liberação de citocinas (Selder et al. 2017; Hellebrekers et al. 2018). Os neutrófilos estão sujeitos a regulação ambiental complexa e isso pode resultar em diferenças significativas na produção de ROS (Panday et al. 2015 e Nguyen et al. 2017). Veenith e outros demonstraram anteriormente que a produção de ROS no COVID-19 é disfuncional (Veenith et al 2022, processo de publicação). Apesar do imenso número de estudos que fornecem evidências de uma resposta imune inata in vivo desregulada em alguns pacientes com COVID-19, tornou-se aparente que a medição da capacidade funcional retida de leucócitos (principalmente neutrófilos) para produzir ROS em resposta ao forbol-12-miristato- O 13-acetato (PMA) em amostras de sangue total pode fornecer um método de detecção rápida de 10 minutos para determinar objetivamente o início ou a ocorrência de COVID-19 grave e monitorar a progressão e o tratamento do COVID-19. Um modelo matemático preditivo ajudaria no diagnóstico e tratamento precoce do COVID-19 e permitiria que os médicos priorizassem os pacientes. Portanto, a análise da produção de ROS em resposta ao PMA na comparação de pneumonia por COVID-19 com indivíduos saudáveis ​​pode revelar essa hipótese.

Método:

O estudo foi realizado com a aprovação do comitê de ética no Hospital da Unidade de Terapia Intensiva (UTI). A população de pacientes consistia em pacientes que foram admitidos na UTI devido à pneumonia por COVID-19; a população voluntária saudável consistia em profissionais de saúde do hospital. A análise foi realizada em amostras clínicas ou por meio de teste de picada no dedo de voluntários saudáveis. A produção de ROS em resposta ao PMA foi analisada 30 minutos após a coleta. O diagnóstico do status de COVID foi confirmado usando o teste de reação em cadeia da polimerase (PCR). Juntamente com uma variedade de testes hematológicos convencionais e observações clínicas, o teste LIT foi realizado todos os dias ou em dias alternados até a morte ou alta da UTI.

Coleção de dados:

Os pacientes foram acompanhados desde a admissão na UTI até o dia da saída ou alta da UTI. Todos os dados foram coletados prospectivamente em formulários de estudo padronizados. As variáveis ​​de dados coletadas na admissão incluíram as características demográficas, diagnóstico, comorbidades, data da positividade do teste de PCR, sintomas de COVID-19, gravidade do COVID-19 (de acordo com a classificação da Organização Mundial da Saúde (OMS), tipo de tratamento, uso de ventilação e tipo de ventilação, relação pressão parcial de oxigênio/fração inspirada de oxigênio (PaO2/FiO2), uso de antibióticos, proteína C reativa (PCR), contagem de neutrófilos, contagem total de leucócitos. Na admissão, a gravidade do paciente foi avaliada com o escore APACHE II e avaliação da gravidade da falência de órgãos (SOFA). Durante a internação na UTI, os pacientes foram avaliados quanto ao desenvolvimento de sepse ou choque séptico. Os sinais vitais no dia em que o teste LIT foi realizado também foram registrados. Os parâmetros de desfecho da unidade de terapia intensiva, como tempo de ventilação mecânica, tempo de internação na UTI, tempo de internação e mortalidade também foram avaliados. A PCR, contagem de neutrófilos e contagem total de leucócitos foram realizadas no dia em que o teste LIT foi realizado dos voluntários saudáveis.

Medições da produção de ROS por luminômetro:

A produção de ROS foi medida de acordo com o método descrito anteriormente [25-27]. Resumidamente, amostras de 10μl de sangue recém-obtido (obtidas por picada no dedo ou punção venosa) foram adicionadas a 100 microlitros de solução salina tamponada com fosfato (PBS) contendo forbol 12-miristato 13-acetato (PMA; Sigma) e luminol. A solução foi incubada por 10 minutos a 37,5 °C. A quimioluminescência foi quantificada após 10 minutos usando luminômetro portátil 3MTM (Clean-Trace, NG3) em unidades relativas de luz (RLU). Os escores LIT como um correlato da função dos neutrófilos para cada paciente (amostrados todos os dias ou em dias alternados) e cada voluntário saudável (amostrados apenas uma vez) foram plotados.

A geração anormalmente alta (hiperprodução) ou baixa (hipoprodução) de ROS foi associada a resultados clínicos adversos. Isso levanta a possibilidade da relação LIT™/contagem de neutrófilos (LIT/N) ser usada como uma ferramenta clínica preditiva.