Un nuovo parametro LIT/N che prevede la sopravvivenza nei pazienti in terapia intensiva COVID-19

Descrizione dettagliata:

È noto che l'infezione da COVID-19 innesca un disturbo infiammatorio multisistemico che può portare a uno spettro di sintomi clinici (Dhama et al. 2020). Circa il 20% dei pazienti mostra insufficienza multisistemica acuta, inclusa l'ARDS, accompagnata da un intenso processo infiammatorio, che è pericoloso per la vita (Wang et al. 2020; Wu et al. 2020; Yang et al. 2020). Tuttavia, nel COVID-19 grave, la conta dei linfociti diminuisce progressivamente, mentre la conta dei neutrofili aumenta gradualmente (Li et al. 2020). Ad oggi, quattro meta-analisi hanno riportato che i pazienti con infezione grave da COVID-19 hanno un NLR più elevato rispetto a quelli con infezione non grave da COVID-19 (Zheng et al. 2020, Chan & Rout. 2020; Ghahrmani et al. 2020; Lagunas-Rangel et al. 2020). Non esiste un livello di soglia obiettivo assoluto riportato per quando la NLR progredisce da quasi normale a moderata a grave.

I neutrofili operano utilizzando una serie di meccanismi diversi tra cui chemiotassi, fagocitosi, rilascio di specie reattive dell'ossigeno (ROS) e proteine ​​granulari e produzione e liberazione di citochine (Selder et al. 2017; Hellebrekers et al. 2018). I neutrofili sono soggetti a complesse regolazioni ambientali e ciò può comportare differenze significative nella produzione di ROS (Panday et al. 2015 e Nguyen et al. 2017). Veenith e altri hanno precedentemente dimostrato che la produzione di ROS in COVID-19 è disfunzionale (Veenith et al 2022, processo di pubblicazione). Nonostante l'immenso numero di studi che forniscono prove di una risposta immunitaria innata in vivo disregolata in alcuni pazienti COVID-19, è diventato evidente che la misurazione della capacità funzionale conservata dei leucociti (principalmente neutrofili) di produrre ROS in risposta al forbolo-12-miristato- Il 13-acetato (PMA) nei campioni di sangue intero potrebbe fornire un metodo di rilevamento rapido in 10 minuti per determinare oggettivamente l'insorgenza o l'insorgenza di COVID-19 grave e monitorare la progressione e il trattamento del COVID-19. Un modello matematico predittivo aiuterebbe la diagnosi precoce e il trattamento di COVID-19 e consentirebbe ai medici di dare la priorità ai pazienti. Pertanto l'analisi della produzione di ROS in risposta alla PMA nella polmonite COVID-19 rispetto a soggetti sani può rivelare questa ipotesi.

Metodo:

Lo studio è stato condotto con l'approvazione del comitato etico nell'ospedale dell'unità di terapia intensiva (ICU). La popolazione di pazienti era composta da pazienti ricoverati in terapia intensiva a causa di polmonite da COVID-19; la popolazione volontaria sana era costituita da operatori sanitari dell'ospedale. L'analisi è stata eseguita su campioni clinici o tramite test con puntura del dito da volontari sani. La produzione di ROS in risposta alla PMA è stata analizzata entro 30 minuti dalla raccolta. La diagnosi dello stato COVID è stata confermata mediante il test di reazione a catena della polimerasi (PCR). Insieme a una serie di test ematologici convenzionali e osservazioni cliniche, il test LIT è stato eseguito ogni giorno oa giorni alterni fino alla morte o alla dimissione dall'unità di terapia intensiva.

Raccolta dati:

I pazienti sono stati seguiti dal loro ricovero in terapia intensiva fino al giorno dell'exitus o della dimissione. Tutti i dati sono stati raccolti in modo prospettico su moduli di studio standardizzati. Le variabili dei dati raccolti al momento del ricovero includevano le caratteristiche demografiche, la diagnosi, le comorbidità, la data di positività del test PCR, i sintomi di COVID-19, la gravità del COVID-19 (secondo la classificazione dell'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS), il tipo di trattamento, l'uso della ventilazione e tipo di ventilazione, rapporto pressione arteriosa parziale dell'ossigeno/frazione di ossigeno inspirato (PaO2/FiO2), uso di antibiotici, proteina C reattiva (PCR), conta dei neutrofili, conta totale dei leucociti. Al momento del ricovero, la gravità del paziente è stata valutata con il punteggio APACHE II e la gravità dell'insufficienza d'organo (SOFA). Durante la degenza in terapia intensiva, i pazienti sono stati valutati per lo sviluppo di sepsi o shock settico. Sono stati registrati anche i segni vitali il giorno in cui è stato eseguito il test LIT. Sono stati valutati anche i parametri di esito dell'unità di terapia intensiva come la durata della ventilazione meccanica, la durata della degenza in terapia intensiva, la durata del ricovero e la mortalità. La PCR, la conta dei neutrofili e la conta totale dei leucociti sono state eseguite il giorno in cui è stato eseguito il test LIT dei volontari sani.

Misurazioni della produzione di ROS mediante luminometro:

La produzione di ROS è stata misurata secondo il metodo precedentemente descritto [25-27]. In breve, campioni da 10 μl di sangue appena ottenuto (ottenuto mediante puntura del dito o prelievo venoso) sono stati aggiunti a 100 microlitri di soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) contenente forbolo 12-miristato 13-acetato (PMA; Sigma) e luminolo. La soluzione è stata incubata per 10 minuti a 37,5°C. La chemiluminescenza è stata quantificata dopo 10 minuti utilizzando il luminometro portatile 3MTM (Clean-Trace, NG3) in unità di luce relativa (RLU). Sono stati tracciati i punteggi LIT come correlato della funzione dei neutrofili per ciascun paziente (campionato ogni giorno o a giorni alterni) e ciascun volontario sano (campionato una sola volta).

La generazione di ROS anormalmente alta (iperproduzione) o bassa (ipoproduzione) è stata associata a esiti clinici avversi. Ciò aumenta la possibilità che il rapporto LIT™/conta dei neutrofili (LIT/N) venga utilizzato come strumento clinico predittivo.