Nowy parametr LIT/N, który przewiduje przeżycie pacjentów z COVID-19 na OIT

Szczegółowy opis:

Wiadomo, że infekcja COVID-19 wyzwala wieloukładowe zaburzenie zapalne, które może prowadzić do spektrum objawów klinicznych (Dhama i in. 2020). U około 20% pacjentów występuje ostra niewydolność wieloukładowa, w tym ARDS, której towarzyszy intensywny, zagrażający życiu proces zapalny (Wang i wsp. 2020; Wu i wsp. 2020; Yang i wsp. 2020). Jednak w ciężkim przebiegu COVID-19 liczba limfocytów stopniowo spada, podczas gdy liczba neutrofili stopniowo wzrasta (Li i wsp. 2020). Do tej pory cztery metaanalizy wykazały, że pacjenci z ciężkim zakażeniem COVID-19 mają wyższy NLR niż pacjenci z łagodnym zakażeniem COVID-19 (Zheng i wsp. 2020, Chan & Rout. 2020; Ghahramani i in. 2020; Lagunas-Rangel i in. 2020). Nie ma bezwzględnego zgłoszonego obiektywnego poziomu progowego, kiedy NLR postępuje od prawie normalnego przez umiarkowany do ciężkiego.

Neutrofile działają z wykorzystaniem wielu różnych mechanizmów, w tym chemotaksji, fagocytozy, uwalniania reaktywnych form tlenu (ROS) i białek ziarnistych oraz produkcji i uwalniania cytokin (Selder i wsp. 2017; Hellebrekers i wsp. 2018). Neutrofile podlegają złożonym regulacjom środowiskowym, co może skutkować znaczącymi różnicami w produkcji RFT (Panday i in. 2015 oraz Nguyen i in. 2017). Veenith i inni wykazali wcześniej, że produkcja ROS w COVID-19 jest dysfunkcyjna (Veenith i in. 2022, proces wydawniczy). Pomimo ogromnej liczby badań dostarczających dowodów na rozregulowaną wrodzoną odpowiedź immunologiczną in vivo u niektórych pacjentów z COVID-19, stało się jasne, że pomiar zachowanej zdolności funkcjonalnej leukocytów (głównie neutrofilów) do wytwarzania ROS w odpowiedzi na forbol-12-mirystynian- Octan 13 (PMA) w próbkach krwi pełnej może zapewnić szybką 10-minutową metodę wykrywania w celu obiektywnego określenia początku lub wystąpienia ciężkiego COVID-19 oraz monitorowania progresji i leczenia COVID-19. Prognozujący model matematyczny pomógłby we wczesnej diagnostyce i leczeniu COVID-19 oraz umożliwiłby klinicystom ustalanie priorytetów pacjentów. Dlatego analiza produkcji ROS w odpowiedzi na PMA w porównaniu z zapaleniem płuc COVID-19 ze zdrowymi osobami może ujawnić tę hipotezę.

Metoda:

Badanie przeprowadzono za zgodą komisji etycznej w Szpitalu Oddziału Intensywnej Terapii (OIOM). Populacja pacjentów składała się z pacjentów przyjętych na OIT z powodu zapalenia płuc wywołanego przez COVID-19; populacja zdrowych ochotników składała się z pracowników służby zdrowia ze szpitala. Analizę przeprowadzono na próbkach klinicznych lub za pomocą testu nakłucia palca od zdrowych ochotników. Wytwarzanie ROS w odpowiedzi na PMA analizowano w ciągu 30 minut od pobrania. Diagnozę statusu COVID potwierdzono za pomocą testu reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR). Wraz z szeregiem konwencjonalnych badań hematologicznych i obserwacją kliniczną, test LIT wykonywano codziennie lub co drugi dzień aż do zgonu lub wypisu z OIT.

Gromadzenie danych:

Pacjentów obserwowano od przyjęcia na OIT do dnia wypisu lub wypisu z OIT. Wszystkie dane zostały zebrane prospektywnie na standardowych formularzach badań. Zmienne danych zebranych przy przyjęciu obejmowały charakterystykę demograficzną, rozpoznanie, choroby współistniejące, datę dodatniego wyniku testu PCR, objawy COVID-19, nasilenie COVID-19 (wg klasyfikacji Światowej Organizacji Zdrowia (WHO), rodzaj leczenia, stosowanie wentylacji i typ wentylacji, stosunek parcjalnego ciśnienia tlenu tętniczego do frakcji tlenu wdychanego (PaO2/FiO2), stosowanie antybiotyków, białko C-reaktywne (CRP), liczba neutrofili, całkowita liczba leukocytów. Przy przyjęciu ciężkość chorego oceniano za pomocą skali APACHE II oraz oceny ciężkości niewydolności narządowej (SOFA). Podczas pobytu na OIT oceniano pacjentów pod kątem rozwoju sepsy lub wstrząsu septycznego. Rejestrowano również parametry życiowe w dniu wykonania badania LIT. Oceniono również parametry wyników oddziału intensywnej terapii, takie jak czas trwania wentylacji mechanicznej, długość pobytu na OIT, długość hospitalizacji i śmiertelność. W dniu wykonania testu LIT u zdrowych ochotników oznaczono CRP, liczbę neutrofili i całkowitą liczbę leukocytów.

Pomiary produkcji RFT luminometrem:

Wytwarzanie ROS mierzono zgodnie z metodą opisaną wcześniej [25-27]. W skrócie, 10 μl próbek świeżo uzyskanej krwi (uzyskanej przez nakłucie palca lub nakłucie żyły) dodano do 100 mikrolitrów soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS) zawierającej 12-mirystynian 13-octanu forbolu (PMA; Sigma) i luminol. Roztwór inkubowano przez 10 minut w temperaturze 37,5°C. Chemiluminescencję oznaczano ilościowo po 10 minutach przy użyciu ręcznego luminometru 3MTM (Clean-Trace, NG3) w względnych jednostkach światła (RLU). Wykreślono wyniki LIT jako korelat funkcji neutrofilów dla każdego pacjenta (pobieranego codziennie lub co drugi dzień) i każdego zdrowego ochotnika (pobieranego tylko raz).

Nienormalnie wysokie (nadprodukcja) lub niskie (hipoprodukcja) wytwarzanie ROS wiązało się z niekorzystnymi wynikami klinicznymi. Rodzi to możliwość zastosowania wskaźnika LIT™/liczby neutrofilów (LIT/N) jako narzędzia predykcyjnego w praktyce klinicznej.