Studie produktu početí odvozeného z ultrazvukově řízené manuální vakuové aspirace

Předčasná těhotenská ztráta je velmi častá, přibližně každá čtvrtá žena zažije v životě potrat [1]. Etiologie těhotenské ztráty zůstává do značné míry neznámá, i když se na ní podílejí genetické, anatomické, endokrinologické a imunologické abnormality [2].

Je známo, že embryonální/fetální chromozomální aberace přispěly k přibližně 50 % časných ztrát těhotenství, z nichž 60–70 % byly aneuploidie, které lze z velké části detekovat současným zlatým standardem karyotypizačního přístupu doporučovaného různými mezinárodními společnostmi. Mezi nevýhody konvenční karyotypizace však patří riziko selhání kultury, kontaminace mateřských buněk (MCC), omezené rozlišení detekce (5-10 Mb) a rozdílný růst specifických buněčných linií, které by mohly bránit diagnostice genetických abnormalit, zejména mozaiky. Další genetické faktory mimo rozlišení karyotypizace nejsou dobře studovány.

Sekvenování nové generace (NGS) přineslo genetické testování na nové hranice a rozšířilo rozsah detekovatelných genomických variant. Navíc jeho výrazné snížení nákladů v průběhu let usnadnilo provádění genetického diagnostického testování. Naše přizpůsobené analytické potrubí sekvenování genomu s mělkou hloubkou čtení, jmenovitě sekvenování genomu s nízkou propustností (GS), umožňuje účinnou a nákladově efektivní detekci variant s počtem kopií v celém genomu (CNV, >50 kb) a nízkoúrovňových chromozomálních mozaik ( pouhých 10 %). Kromě toho byly v současných studiích méně pochopeny role kryptických strukturních přeuspořádání, absence heterozygotnosti (AOH) a jednonukleotidové varianty (SNV).

Různé verze sekvenačních platforem zaměřených na různé varianty již byly zavedeny a ověřeny v Prenatální genetické diagnostické laboratoři na Čínské univerzitě v Hong Kongu, včetně FetalSeq, ChromoSeq a 30xWGS.

Lidské endometriální a deciduální tkáně obsahující nesčetné množství imunitních a zánětlivých populací [3–4] jsou imunologicky dynamické. V časné proliferativní fázi menstruačního cyklu jsou T-buňky nejhojnější leukocytární populací v endometriu, ale během časného těhotenství se snižují na 20 % všech stromálních leukocytů [5]. Makrofágy jsou také přítomny v endometriálních tkáních během všech fází menstruačního cyklu, ale jsou nejhojnější v pozdním sekrečním endometriu a v deciduálních tkáních během časného těhotenství [6]. Nejhojnější populací (70 %) stromálních leukocytů pozorovaných v pozdním sekrečním endometriu a v decidua během časného normálního těhotenství jsou velké granulární lymfocyty (LGL) nesoucí jedinečný fenotyp: CD56++, CD16-, CD57-, CD2±, CD38±, CD3-, CD4-, CD8- [7-10]. U žen s opakovanými potraty byl hlášen zvýšený průměrný počet CD56+ buněk v sekrečním endometriu [11].

Hypotéza, že rovnováha mezi podskupinami T-buněk (tj. CD4+ a CD8+ buňky) hraje roli v udržení úspěšného těhotenství je kontroverzní. Některé studie neuvádějí žádný rozdíl mezi podíly podskupin T-buněk ani v sekrečním endometriu, ani v decidua v prvním trimestru od žen s anamnézou opakované ztráty těhotenství ve srovnání s normálními kontrolami; zatímco jiní popsali posun směrem k vyššímu poměru CD8+ T-buněk v endometriálních biopsiích u žen s anamnézou opakované ztráty těhotenství [12–15].

Stav aktivace populací T-buněk může poskytnout další indikátor buněčné imunity, která se potenciálně podílí na ztrátě těhotenství. Bylo popsáno, že receptor IL-2 chybí na T-buňkách v normálních deciduálních tkáních prvního trimestru pomocí imunohistochemických technik [16]; pomocí průtokové cytometrie však byly v deciduální tkáni identifikovány CD3+CD25+ aktivované T-buňky [17]. CD69 je další časný aktivační marker exprimovaný na povrchu T-buněk [18]. Část T-buněk konstitutivně exprimuje tento marker v průběhu menstruačního cyklu a v normálním časném těhotenství.

Přibližně 60 % spontánních potratů lze přičíst numericky abnormálním chromozomům ve vyvíjejícím se konceptu [19], avšak dosud omezené údaje týkající se imunologických jevů u decidua potratených žen porovnávaly jejich data ve vztahu k dobře definovaným chromozomálním abnormalitám patřícím k konceptům. To je důležité, protože trizomie 16 chromozomové abnormality, která se vyskytuje u 26 % všech spontánních potratů, je neslučitelná se životem [20] a byla by tak nespornou příčinou samovolného potratu. Účelem naší studie tedy bylo zjistit, zda se subpopulace deciduálních leukocytů a jejich asociované aktivační markery liší mezi ženami, které potratily buď s trizomií 16 konceptu (47XY+16 nebo 47XX+16) ve srovnání s chromozomálně normálním mužským konceptem (46XY). a ve srovnání s gestačně věkově odpovídajícími deciduálními tkáněmi. Vzorky z pravděpodobně normálních ženských konceptů (46XX) nebyly vybrány pro studii kvůli neschopnosti přesně odlišit od možné kontaminace mateřskými buňkami.

Pro zvládnutí potratu nebo ukončení těhotenství (TOP) při ztrátě v prvním trimestru je jednou z možností léčby ultrazvukem řízená manuální vakuová aspirace (USG-MVA). USG-MVA pro léčbu časné ztráty těhotenství se používá po mnoho desetiletí. Bylo publikováno, že USG-MVA je bezpečnější, nákladově efektivnější a je spojen s kratší dobou hospitalizace a náklady než chirurgická evakuace v celkové anestezii [21, 22]. USG-MVA je chirurgická technika sací kyretáže. Provádí se pomocí ručního zdroje podtlaku (stříkačka s válcem a pístem) připojeného k děložní kanyle [23, 24] Přístroj USG-MVA funguje tak, že nasává děložní obsah přes kanylu do stříkačky. Kromě toho může být produkt početí odvozený z USG-MVA odeslán ke karyotypizační analýze.