Studie av unnfangelsesprodukt avledet fra ultralydveiledet manuell vakuumaspirasjon

Tidlig svangerskapstap er svært vanlig, omtrent én av fire kvinner vil oppleve en spontanabort i løpet av livet [1]. Etiologien til svangerskapstap er stort sett ukjent, selv om genetiske, anatomiske, endokrinologiske og immunologiske abnormiteter har vært implisert [2].

Det er kjent at embryonale/føtale kromosomavvik bidro til omtrent 50 % av tidlig svangerskapstap, hvorav 60-70 % var aneuploider, kan i stor grad påvises av den nåværende gullstandard karyotyping-tilnærmingen anbefalt av forskjellige internasjonale samfunn. Ulempene med konvensjonell karyotyping inkluderer imidlertid risikoen for kultursvikt, maternal cellekontaminering (MCC), begrenset deteksjonsoppløsning (5-10 Mb) og differensiell vekst av spesifikke cellelinjer som kan hindre diagnostisering av genetiske abnormiteter, spesielt mosaikk. Ytterligere genetiske faktorer utover oppløsningen av karyotyping er ikke godt studert.

Neste generasjons sekvensering (NGS) har brakt genetisk testing til nye grenser, og utvidet omfanget av påvisbare genomiske varianter. Dessuten har den betydelige kostnadsreduksjonen gjennom årene gjort det lettere å implementere genetisk diagnostisk testing. Vår tilpassede, grunne lesedybde-genomsekvensering analytiske pipeline, nemlig lavpass-genomsekvensering (GS), muliggjør effektiv og kostnadseffektiv påvisning av genomomfattende kopinummervarianter (CNVs, >50 kb) og kromosomale mosaikk på lavt nivå ( så lavt som 10 %). Videre ble rollene til kryptiske strukturelle omorganiseringer, fravær av heterozygositet (AOH) og enkeltnukleotidvarianter (SNV) mindre forstått i nåværende studier.

Ulike versjoner av sekvenseringsplattformer rettet mot forskjellige varianter er allerede etablert og validert i Prenatal Genetic Diagnostic Laboratory, The Chinese University of Hong Kong, inkludert FetalSeq, ChromoSeq og 30xWGS.

Humant endometrial og decidualvev, som inneholder et mylder av immun- og inflammatoriske populasjoner [3-4], er immunologisk dynamiske. I den tidlige proliferative fasen av menstruasjonssyklusen er T-celler den hyppigst forekommende leukocyttpopulasjonen i endometriet, men de reduseres til 20 % av alle stromale leukocytter under tidlig graviditet [5]. Makrofager er også tilstede i endometrievev i alle faser av menstruasjonssyklusen, men er mest rikelig i sent sekretorisk endometrium og i decidualvev under tidlig graviditet [6]. Den mest tallrike populasjonen (70 %) av stromale leukocytter observert i sent sekretorisk endometrium og i decidua under tidlig normal graviditet er store granulære lymfocytter (LGL) som bærer den unike fenotypen: CD56++, CD16-, CD57-, CD2±, CD38±, CD3-, CD4-, CD8- [7-10]. Økt gjennomsnittlig antall CD56+-celler er rapportert i sekretorisk endometrium hos kvinner med tilbakevendende spontanaborter [11].

Hypotesen om at balansen mellom undergrupper av T-celler (dvs. CD4+ og CD8+ celler) spiller en rolle i å opprettholde vellykket graviditet er kontroversielt. Noen studier har ikke rapportert noen forskjell mellom proporsjonene av T-celleundergrupper i verken sekretorisk endometrium eller decidua fra første trimester fra kvinner med en historie med tilbakevendende svangerskapstap sammenlignet med normale kontroller; mens andre har beskrevet et skifte mot et høyere forhold mellom CD8+ T-celler i endometriebiopsier fra kvinner med en historie med tilbakevendende svangerskapstap [12-15].

Aktiveringsstatusen til T-cellepopulasjoner kan gi en annen indikator på cellulær immunitet som potensielt er involvert i tap av graviditet. IL-2-reseptoren er rapportert å være fraværende på T-celler i normalt decidualvev i første trimester ved bruk av immunhistokjemiske teknikker [16]; Ved bruk av flowcytometri har imidlertid CD3+CD25+-aktiverte T-celler blitt identifisert i decidualvev [17]. CD69 er en annen tidlig aktiveringsmarkør uttrykt på overflaten av T-celler [18]. En andel av T-cellene uttrykker konstitutivt denne markøren gjennom menstruasjonssyklusen og i normal tidlig graviditet.

Omtrent 60 % av spontane aborter kan tilskrives numerisk unormale kromosomer i utviklingskonseptet [19], men begrensede data til dags dato som adresserer immunologiske fenomener i decidua hos aborterte kvinner har sammenlignet dataene deres i forhold til veldefinerte kromosomavvik som tilhører konsepter. Dette er viktig siden kromosomavviket trisomi 16, som forekommer i 26 % av alle spontanaborter, er uforenlig med livet [20] og vil dermed være en ubestridt årsak til spontanabort. Derfor var hensikten med vår studie å bestemme om deciduelle leukocyttsubpopulasjoner og deres tilhørende aktiveringsmarkører var forskjellige mellom kvinner som hadde spontanabort av enten en trisomi 16-konsept (47XY+16 eller 47XX+16) sammenlignet med en kromosomalt normal mannlig konseptus (46XY) og sammenlignet med svangerskapsmessig alderstilpasset decidualvev. Prøver fra antagelig normale kvinnelige konsepter (46XX) ble ikke valgt for studier på grunn av manglende evne til nøyaktig å skille fra mulig morscellekontaminering.

For å håndtere spontanabort eller svangerskapsavbrudd (TOP) ved tap i første trimester, er ultralydveiledet manuell vakuumaspirasjon (USG-MVA) et av behandlingsalternativene. USG-MVA for behandling av tidlig svangerskapstap har blitt brukt i mange tiår. Det ble rapportert at USG-MVA er sikrere, mer kostnadseffektivt og er assosiert med kortere sykehusinnleggelsestid og -kostnader enn kirurgisk evakuering under generell anestesi [21, 22]. USG-MVA er en kirurgisk teknikk for sugekuretasje. Det utføres ved å bruke en håndholdt vakuumkilde (en sprøyte med sylinder og stempel) festet til en livmorkanyle [23, 24] USG-MVA-enheten virker ved å aspirere livmorinnholdet via kanylen inn i sprøyten. Videre kan unnfangelsesprodukt avledet fra USG-MVA sendes for karyotypingsanalyse.