Studio del prodotto del concepimento derivato dall'aspirazione manuale del vuoto guidata da ultrasuoni

La perdita precoce della gravidanza è molto comune, circa una donna su quattro sperimenterà un aborto spontaneo nel corso della sua vita [1]. L'eziologia della perdita di gravidanza rimane in gran parte sconosciuta, sebbene siano state implicate anomalie genetiche, anatomiche, endocrinologiche e immunologiche [2].

È noto che le aberrazioni cromosomiche embrionali/fetali hanno contribuito a circa il 50% della perdita precoce della gravidanza, tra cui il 60-70% erano aneuploidie, in gran parte rilevabili dall'attuale approccio cariotipico gold standard raccomandato da varie società internazionali. Tuttavia, gli svantaggi del cariotipo convenzionale includono il rischio di fallimento della coltura, contaminazione delle cellule materne (MCC), risoluzione di rilevamento limitata (5-10 Mb) e crescita differenziale di specifici lignaggi cellulari che potrebbero ostacolare la diagnosi di anomalie genetiche, in particolare mosaicismi. Ulteriori fattori genetici oltre la risoluzione del cariotipo non sono ben studiati.

Il sequenziamento di nuova generazione (NGS) ha portato i test genetici verso nuove frontiere, ampliando la portata delle varianti genomiche rilevabili. Inoltre, la sua significativa riduzione dei costi nel corso degli anni ha facilitato l'implementazione dei test diagnostici genetici. La nostra pipeline analitica di sequenziamento del genoma a bassa profondità di lettura personalizzata, in particolare il sequenziamento del genoma passa-basso (GS), consente il rilevamento efficiente ed economico delle varianti del numero di copie dell'intero genoma (CNV,> 50 kb) e dei mosaicismi cromosomici di basso livello ( fino al 10%). Inoltre, i ruoli dei riarrangiamenti strutturali criptici, dell'assenza di eterozigosi (AOH) e della variante a singolo nucleotide (SNV) erano meno compresi negli studi attuali.

Varie versioni di piattaforme di sequenziamento mirate a diverse varianti erano già state stabilite e convalidate nel Prenatal Genetic Diagnostic Laboratory, l'Università cinese di Hong Kong, tra cui FetalSeq, ChromoSeq e 30xWGS.

I tessuti endometriali e deciduali umani, contenenti una miriade di popolazioni immunitarie e infiammatorie [3-4], sono immunologicamente dinamici. Nella prima fase proliferativa del ciclo mestruale, i linfociti T sono la popolazione leucocitaria più abbondante nell'endometrio, ma diminuiscono al 20% di tutti i leucociti stromali durante l'inizio della gravidanza [5]. I macrofagi sono presenti anche nei tessuti endometriali durante tutte le fasi del ciclo mestruale, ma sono più abbondanti nell'endometrio tardivo secretorio e nei tessuti decidui durante l'inizio della gravidanza [6]. La popolazione più abbondante (70%) di leucociti stromali osservata nell'endometrio tardivo secretorio e nella decidua durante l'inizio della gravidanza normale sono i grandi linfociti granulari (LGL) recanti il ​​fenotipo unico: CD56++, CD16-, CD57-, CD2±, CD38±, CD3-, CD4-, CD8- [7-10]. Un aumento del numero medio di cellule CD56+ è stato riportato nell'endometrio secretorio di donne con aborti ricorrenti [11].

L'ipotesi che l'equilibrio tra sottoinsiemi di cellule T (cioè CD4+ e CD8+) svolge un ruolo nel mantenimento di una gravidanza di successo è controverso. Alcuni studi non hanno riportato alcuna differenza tra le proporzioni dei sottogruppi di cellule T nell'endometrio secretorio o nel primo trimestre decidua di donne con una storia di aborti ricorrenti rispetto ai controlli normali; mentre altri hanno descritto uno spostamento verso un più alto rapporto di cellule T CD8+ nelle biopsie endometriali di donne con una storia di aborti ricorrenti [12-15].

Lo stato di attivazione delle popolazioni di cellule T può fornire un altro indicatore dell'immunità cellulare potenzialmente coinvolta nella perdita della gravidanza. È stato riportato che il recettore IL-2 è assente sulle cellule T nei normali tessuti deciduali del primo trimestre utilizzando tecniche immunoistochimiche [16]; tuttavia, utilizzando la citometria a flusso, le cellule T attivate CD3+CD25+ sono state identificate nel tessuto deciduale [17]. CD69 è un altro marker di attivazione precoce espresso sulla superficie delle cellule T [18]. Una parte dei linfociti T esprime costitutivamente questo marcatore durante tutto il ciclo mestruale e nella normale gravidanza precoce.

Circa il 60% degli aborti spontanei sono attribuibili a cromosomi numericamente anormali nel concepito in via di sviluppo [19], tuttavia i dati limitati fino ad oggi riguardanti i fenomeni immunologici nella decidua delle donne abortite hanno confrontato i loro dati relativi a anomalie cromosomiche ben definite appartenenti ai concepiti. Questo è importante poiché l'anomalia cromosomica trisomia 16, che si verifica nel 26% di tutti gli aborti spontanei, è incompatibile con la vita [20] e sarebbe quindi una causa indiscussa di aborto spontaneo. Pertanto, lo scopo del nostro studio era determinare se le sottopopolazioni di leucociti deciduali e i loro marcatori di attivazione associati fossero diversi tra le donne che avevano aborto spontaneo di un concepito con trisomia 16 (47XY+16 o 47XX+16) rispetto a un concepito maschio cromosomicamente normale (46XY) e confrontato con i tessuti decidui della stessa età gestazionale. I campioni di concettuali femminili presumibilmente normali (46XX) non sono stati scelti per lo studio a causa dell'incapacità di differenziare accuratamente dalla possibile contaminazione delle cellule materne.

Per la gestione dell'aborto spontaneo o dell'interruzione della gravidanza (TOP) nella perdita del primo trimestre, l'aspirazione manuale del vuoto guidata da ultrasuoni (USG-MVA) è una delle opzioni di trattamento. USG-MVA per il trattamento della perdita precoce della gravidanza è stato utilizzato per molti decenni. È stato riportato che USG-MVA è più sicuro, più conveniente ed è associato a tempi e costi di ospedalizzazione più brevi rispetto all'evacuazione chirurgica in anestesia generale [21, 22]. USG-MVA è una tecnica chirurgica di curettage per aspirazione. Viene eseguito utilizzando una fonte di vuoto portatile (una siringa con cilindro e stantuffo) attaccata a una cannula uterina [23, 24]. Il dispositivo USG-MVA funziona aspirando il contenuto uterino attraverso la cannula nella siringa. Inoltre, il prodotto del concepimento derivato da USG-MVA può essere inviato per l'analisi del cariotipo.