Badanie produktu poczęcia pochodzącego z ręcznej aspiracji próżniowej pod kontrolą ultradźwięków

Wczesna utrata ciąży jest bardzo częsta, około jedna na cztery kobiety doświadczy poronienia w swoim życiu [1]. Etiologia utraty ciąży pozostaje w dużej mierze nieznana, chociaż wskazuje się na nieprawidłowości genetyczne, anatomiczne, endokrynologiczne i immunologiczne [2].

Wiadomo, że embrionalne/płodowe aberracje chromosomalne przyczyniły się do około 50% wczesnych strat ciąż, wśród których 60-70% stanowiły aneuploidie, w dużej mierze można je wykryć za pomocą obecnego złotego standardu kariotypowania, zalecanego przez różne międzynarodowe towarzystwa. Jednak wady konwencjonalnego kariotypowania obejmują ryzyko niepowodzenia hodowli, zanieczyszczenie komórkami matczynymi (MCC), ograniczoną rozdzielczość wykrywania (5-10 Mb) i zróżnicowany wzrost określonych linii komórkowych, co może utrudniać diagnozę nieprawidłowości genetycznych, zwłaszcza mozaikowatości. Dodatkowe czynniki genetyczne wykraczające poza rozdzielczość kariotypowania nie są dobrze zbadane.

Sekwencjonowanie nowej generacji (NGS) wyniosło testy genetyczne na nowe granice, poszerzając zakres wykrywalnych wariantów genomowych. Co więcej, jego znaczna redukcja kosztów na przestrzeni lat ułatwiła wdrożenie genetycznych badań diagnostycznych. Nasz niestandardowy potok analityczny sekwencjonowania genomu z płytkim odczytem, ​​a mianowicie sekwencjonowanie genomu dolnoprzepustowego (GS), umożliwia wydajne i opłacalne wykrywanie wariantów liczby kopii całego genomu (CNV,> 50 kb) i mozaicyzmu chromosomalnego niskiego poziomu ( nawet 10%). Ponadto role tajemniczych przegrupowań strukturalnych, braku heterozygotyczności (AOH) i wariantu pojedynczego nukleotydu (SNV) były mniej zrozumiałe w obecnych badaniach.

Różne wersje platform sekwencjonowania ukierunkowane na różne warianty zostały już ustalone i zatwierdzone w Prenatalnym Laboratorium Diagnostyki Genetycznej Chińskiego Uniwersytetu w Hongkongu, w tym FetalSeq, ChromoSeq i 30xWGS.

Ludzkie tkanki endometrium i tkanki doczesne, zawierające niezliczone populacje odpornościowe i zapalne [3-4], są immunologicznie dynamiczne. We wczesnej fazie proliferacyjnej cyklu miesiączkowego limfocyty T są najliczniejszą populacją leukocytów w endometrium, ale we wczesnej ciąży ich liczba spada do 20% wszystkich leukocytów podścieliska [5]. Makrofagi są również obecne w tkankach endometrium we wszystkich fazach cyklu miesiączkowego, ale najliczniej występują w endometrium późno wydzielniczym i tkankach doczesnych we wczesnej ciąży [6]. Najliczniejszą populacją (70%) leukocytów podścieliska obserwowanych w endometrium późnym wydzielniczym oraz w doczesnej podczas wczesnej ciąży prawidłowej są duże limfocyty ziarniste (LGL) o unikalnym fenotypie: CD56++, CD16-, CD57-, CD2±, CD38±, CD3-, CD4-, CD8- [7-10]. Odnotowano zwiększoną średnią liczbę komórek CD56+ w wydzielniczym endometrium kobiet z poronieniami nawracającymi [11].

Hipoteza, że ​​równowaga między podzbiorami komórek T (tj. Komórki CD4+ i CD8+) odgrywają rolę w utrzymaniu udanej ciąży jest kontrowersyjna. Niektóre badania wykazały brak różnic między proporcjami podzbiorów komórek T w endometrium wydzielniczym lub doczesnej w pierwszym trymestrze u kobiet z nawracającymi poronieniami w wywiadzie w porównaniu z normalnymi grupami kontrolnymi; podczas gdy inni opisali zmianę w kierunku wyższego stosunku limfocytów T CD8+ w biopsjach endometrium u kobiet z nawracającymi stratami ciąż w wywiadzie [12-15].

Stan aktywacji populacji komórek T może stanowić kolejny wskaźnik odporności komórkowej potencjalnie związany z utratą ciąży. Donoszono, że receptor IL-2 jest nieobecny na komórkach T w normalnych tkankach doczesnych pierwszego trymestru przy użyciu technik immunohistochemicznych [16]; jednak za pomocą cytometrii przepływowej zidentyfikowano limfocyty T aktywowane CD3+CD25+ w tkance szczątkowej [17]. CD69 jest kolejnym markerem wczesnej aktywacji wyrażanym na powierzchni limfocytów T [18]. Część komórek T konstytutywnie eksprymuje ten marker podczas cyklu miesiączkowego i podczas normalnej wczesnej ciąży.

Około 60% samoistnych poronień można przypisać nieprawidłowym liczbowo chromosomom w rozwijającym się zarodku [19], jednak ograniczone do tej pory dane dotyczące zjawisk immunologicznych w doczesnych kobietach, które poroniły, porównywały te dane z dobrze zdefiniowanymi nieprawidłowościami chromosomalnymi należącymi do zarodków. Jest to ważne, ponieważ trisomia 16 nieprawidłowości chromosomowych, która występuje w 26% wszystkich samoistnych poronień, jest niezgodna z życiem [20] i tym samym byłaby niekwestionowaną przyczyną samoistnych poronień. Dlatego celem naszego badania było ustalenie, czy doczesne subpopulacje leukocytów i związane z nimi markery aktywacji różniły się między kobietami, które poroniły zarodek trisomii 16 (47XY + 16 lub 47XX + 16) w porównaniu z prawidłowym pod względem chromosomalnym męskim zarodkiem (46XY) i porównano z tkankami liściastymi dobranymi pod względem wieku ciążowego. Próbki z przypuszczalnie normalnych żeńskich zarodków (46XX) nie zostały wybrane do badań z powodu niemożności dokładnego odróżnienia od możliwego zanieczyszczenia komórkami matczynymi.

W przypadku poronienia lub przerwania ciąży (TOP) w pierwszym trymestrze ciąży jedną z opcji leczenia jest ręczna aspiracja próżniowa pod kontrolą USG (USG-MVA). USG-MVA w leczeniu wczesnych poronień jest stosowana od wielu dziesięcioleci. Donoszono, że USG-MVA jest bezpieczniejsza, bardziej efektywna kosztowo i wiąże się z krótszym czasem i kosztem hospitalizacji niż ewakuacja chirurgiczna w znieczuleniu ogólnym [21, 22]. USG-MVA to chirurgiczna technika kiretażu ssącego. Wykonuje się go za pomocą ręcznego źródła podciśnienia (strzykawki z cylindrem i tłokiem) zamocowanego do kaniuli macicznej [23, 24]. Działanie urządzenia USG-MVA polega na zasysaniu treści macicy przez kaniulę do strzykawki. Ponadto produkt zapłodnienia pochodzący z USG-MVA można przesłać do analizy kariotypu.