Изучение продукта зачатия, полученного в результате ручной вакуумной аспирации под ультразвуковым контролем

Потеря беременности на ранних сроках очень распространена, примерно каждая четвертая женщина переживает выкидыш в течение жизни [1]. Этиология невынашивания беременности остается в значительной степени неизвестной, хотя в нее вовлечены генетические, анатомические, эндокринологические и иммунологические аномалии [2].

Известно, что эмбриональные/фетальные хромосомные аберрации являются причиной примерно 50% ранних потерь беременности, среди которых 60-70% приходится на анеуплоидии, в значительной степени могут быть обнаружены с помощью текущего золотого стандарта кариотипирования, рекомендованного различными международными обществами. Однако к недостаткам традиционного кариотипирования относятся риск несостоятельности культивирования, контаминация материнскими клетками (MCC), ограниченное разрешение обнаружения (5–10 Мб) и дифференцированный рост специфических клеточных линий, что может затруднить диагностику генетических аномалий, особенно мозаицизма. Дополнительные генетические факторы, выходящие за рамки разрешения кариотипирования, недостаточно изучены.

Секвенирование следующего поколения (NGS) вывело генетическое тестирование на новые рубежи, расширив диапазон обнаруживаемых геномных вариантов. Более того, значительное снижение затрат за эти годы способствовало внедрению генетического диагностического тестирования. Наш специализированный аналитический конвейер для секвенирования генома с малой глубиной считывания, а именно низкочастотное секвенирование генома (GS), обеспечивает эффективное и экономичное обнаружение вариантов числа копий всего генома (CNV,> 50 т.п.н.) и низкоуровневых хромосомных мозаицизмов ( не более 10%). Кроме того, в текущих исследованиях роль скрытых структурных перестроек, отсутствия гетерозиготности (AOH) и однонуклеотидного варианта (SNV) была менее понятна.

Различные версии платформ секвенирования, предназначенные для различных вариантов, уже были созданы и проверены в лаборатории пренатальной генетической диагностики Китайского университета Гонконга, включая FetalSeq, ChromoSeq и 30xWGS.

Эндометриальная и децидуальная ткани человека, содержащие множество иммунных и воспалительных популяций [3-4], иммунологически динамичны. В ранней пролиферативной фазе менструального цикла Т-клетки являются наиболее многочисленной популяцией лейкоцитов в эндометрии, но на ранних сроках беременности их количество снижается до 20% всех стромальных лейкоцитов [5]. Макрофаги также присутствуют в тканях эндометрия во все фазы менструального цикла, но наиболее многочисленны в позднесекреторном эндометрии и в децидуальной ткани на ранних сроках беременности [6]. Наиболее многочисленная популяция (70%) стромальных лейкоцитов, наблюдаемая в позднесекреторном эндометрии и в децидуальной оболочке на ранних сроках нормально протекающей беременности, представлена ​​крупными гранулярными лимфоцитами (БГЛ), имеющими уникальный фенотип: CD56++, CD16-, CD57-, CD2±, CD38±, CD3-, CD4-, CD8- [7-10]. Сообщалось о повышении среднего количества клеток CD56+ в секреторном эндометрии женщин с привычным невынашиванием беременности [11].

Гипотеза о том, что баланс между подмножествами Т-клеток (т. CD4+ и CD8+ клетки) играет роль в поддержании успешной беременности, является спорным. В некоторых исследованиях не сообщалось об отсутствии различий между пропорциями подмножеств Т-клеток в секреторном эндометрии или децидуальной оболочке первого триместра у женщин с привычным невынашиванием беременности в анамнезе по сравнению с контрольной группой; в то время как другие описали сдвиг в сторону более высокого соотношения CD8+ Т-клеток в биоптатах эндометрия у женщин с невынашиванием беременности в анамнезе [12-15].

Статус активации популяций Т-клеток может служить еще одним индикатором клеточного иммунитета, потенциально связанного с невынашиванием беременности. Сообщалось об отсутствии рецептора IL-2 на Т-клетках в нормальных децидуальных тканях первого триместра с использованием иммуногистохимических методов [16]; однако с помощью проточной цитометрии в децидуальной ткани были идентифицированы CD3+CD25+ активированные Т-клетки [17]. CD69 — еще один маркер ранней активации, экспрессируемый на поверхности Т-клеток [18]. Часть Т-клеток конститутивно экспрессирует этот маркер в течение всего менструального цикла и при нормальной ранней беременности.

Приблизительно 60% спонтанных абортов связаны с числовыми аномалиями хромосом в развивающемся концептусе [19], однако ограниченные данные на сегодняшний день, касающиеся иммунологических явлений в децидуальной оболочке женщин, перенесших выкидыш, сравнивают их данные с четко определенными хромосомными аномалиями, принадлежащими концептусам. Это важно, поскольку хромосомная аномалия трисомия 16, встречающаяся в 26% всех самопроизвольных абортов, несовместима с жизнью [20] и, таким образом, является бесспорной причиной самопроизвольного аборта. Таким образом, цель нашего исследования заключалась в том, чтобы определить, различаются ли субпопуляции децидуальных лейкоцитов и связанные с ними маркеры активации у женщин с невынашиванием беременности с трисомией 16 (47XY+16 или 47XX+16) по сравнению с мужчинами с хромосомно нормальным зачатием (46XY). и по сравнению с децидуальными тканями того же гестационного возраста. Образцы от предположительно нормальных самок зародышей (46XX) не были выбраны для исследования из-за невозможности точно отличить их от возможного загрязнения материнскими клетками.

Одним из вариантов лечения выкидыша или прерывания беременности (ПРБ) при невынашивании беременности в первом триместре является мануальная вакуумная аспирация под ультразвуковым контролем (USG-MVA). USG-MVA для лечения потери беременности на ранних сроках используется в течение многих десятилетий. Сообщалось, что USG-MVA более безопасна, экономически эффективна и связана с более коротким временем госпитализации и стоимостью, чем хирургическая эвакуация под общей анестезией [21, 22]. USG-MVA представляет собой хирургическую технику аспирационного выскабливания. Это выполняется с помощью ручного источника вакуума (шприца с цилиндром и поршнем), прикрепленного к маточной канюле [23, 24]. Устройство USG-MVA работает путем аспирации содержимого матки через канюлю в шприц. Кроме того, продукт зачатия, полученный с помощью USG-MVA, может быть отправлен на анализ кариотипа.