Studie van het conceptieproduct afgeleid van door echografie geleide handmatige vacuümaspiratie

Vroegtijdig zwangerschapsverlies komt zeer vaak voor, ongeveer een op de vier vrouwen krijgt tijdens haar leven een miskraam [1]. De etiologie van zwangerschapsverlies blijft grotendeels onbekend, hoewel er genetische, anatomische, endocrinologische en immunologische afwijkingen bij betrokken zijn [2].

Het is bekend dat embryonale/foetale chromosomale afwijkingen bijdroegen aan ongeveer 50% van het verlies van vroege zwangerschappen, waaronder 60-70% aneuploïdieën, grotendeels kunnen worden opgespoord door de huidige gouden standaard karyotyperingsbenadering die wordt aanbevolen door verschillende internationale verenigingen. De nadelen van conventionele karyotypering zijn echter het risico van kweekfalen, maternale celbesmetting (MCC), beperkte detectieresolutie (5-10 Mb) en differentiële groei van specifieke cellijnen die de diagnose van genetische afwijkingen, met name mozaïcisme, zouden kunnen belemmeren. Bijkomende genetische factoren buiten de resolutie van karyotypering zijn niet goed bestudeerd.

Sequencing van de volgende generatie (NGS) heeft genetische testen naar nieuwe grenzen gebracht, waardoor de reikwijdte van detecteerbare genomische varianten is uitgebreid. Bovendien heeft de aanzienlijke verlaging van de kosten in de loop der jaren de implementatie van genetische diagnostische tests vergemakkelijkt. Onze op maat gemaakte ondiepe analysepijplijn voor genoomsequencing, namelijk low-pass genome sequencing (GS), maakt efficiënte en kosteneffectieve detectie mogelijk van genoombrede kopie-nummervarianten (CNV's,> 50 kb) en low-level chromosomale mozaïekismen ( zo laag als 10%). Bovendien werden de rollen van cryptische structurele herschikkingen, afwezigheid van heterozygositeit (AOH) en single-nucleotide variant (SNV) in de huidige onderzoeken minder begrepen.

Verschillende versies van sequencing-platforms gericht op verschillende varianten waren al vastgesteld en gevalideerd in het Prenatal Genetic Diagnostic Laboratory van de Chinese Universiteit van Hong Kong, waaronder FetalSeq, ChromoSeq en 30xWGS.

Menselijke endometrium- en deciduale weefsels, die een groot aantal immuun- en inflammatoire populaties bevatten [3-4], zijn immunologisch dynamisch. In de vroege proliferatieve fase van de menstruatiecyclus zijn T-cellen de meest voorkomende leukocytenpopulatie in het endometrium, maar ze nemen af ​​tot 20% van alle stromale leukocyten tijdens de vroege zwangerschap [5]. Macrofagen zijn ook aanwezig in endometriumweefsel tijdens alle fasen van de menstruele cyclus, maar komen het meest voor in laat secretoir endometrium en in deciduale weefsels tijdens de vroege zwangerschap [6]. De meest voorkomende populatie (70%) van stromale leukocyten waargenomen in laat secretoir endometrium en in de decidua tijdens vroege normale zwangerschap zijn grote granulaire lymfocyten (LGL) met het unieke fenotype: CD56++, CD16-, CD57-, CD2±, CD38±, CD3-, CD4-, CD8- [7-10]. Er zijn verhoogde gemiddelde aantallen CD56+-cellen gemeld in het secretoire endometrium van vrouwen met herhaalde miskramen [11].

De hypothese dat de balans tussen subsets van T-cellen (d.w.z. CD4+- en CD8+-cellen) een rol spelen bij het in stand houden van een succesvolle zwangerschap is controversieel. Sommige studies hebben geen verschil gerapporteerd tussen de proporties van T-cel-subsets in secretoir endometrium of decidua in het eerste trimester van vrouwen met een voorgeschiedenis van herhaald zwangerschapsverlies in vergelijking met normale controles; terwijl anderen een verschuiving hebben beschreven naar een hoger percentage CD8+ T-cellen in endometriumbiopten van vrouwen met een voorgeschiedenis van herhaalde zwangerschapsverliezen [12-15].

De activeringsstatus van T-celpopulaties kan een andere indicator zijn van cellulaire immuniteit die mogelijk betrokken is bij zwangerschapsverlies. Er is gemeld dat de IL-2-receptor afwezig is op T-cellen in normale deciduale weefsels in het eerste trimester met behulp van immunohistochemische technieken [16]; met behulp van flowcytometrie zijn echter CD3+CD25+ geactiveerde T-cellen geïdentificeerd in deciduale weefsel [17]. CD69 is een andere marker voor vroege activering die tot expressie wordt gebracht op het oppervlak van T-cellen [18]. Een deel van de T-cellen brengt deze marker constitutief tot expressie tijdens de menstruatiecyclus en tijdens een normale vroege zwangerschap.

Ongeveer 60% van de spontane abortussen is toe te schrijven aan numeriek abnormale chromosomen in de zich ontwikkelende conceptus [19], maar beperkte gegevens tot nu toe over immunologische verschijnselen in de decidua van miskraamvrouwen hebben hun gegevens vergeleken met goed gedefinieerde chromosomale afwijkingen die behoren tot conceptussen. Dit is belangrijk omdat de chromosoomafwijking trisomie 16, die bij 26% van alle spontane abortussen voorkomt, onverenigbaar is met het leven [20] en dus een onbetwiste oorzaak van een spontane abortus zou zijn. Daarom was het doel van onze studie om te bepalen of deciduale leukocytensubpopulaties en hun bijbehorende activeringsmarkers verschillend waren tussen vrouwen met een miskraam van ofwel een trisomie 16 conceptus (47XY + 16 of 47XX + 16) in vergelijking met een chromosomaal normale mannelijke conceptus (46XY). en vergeleken met op zwangerschapsduur afgestemde deciduale weefsels. Monsters van vermoedelijk normale vrouwelijke conceptussen (46XX) werden niet gekozen voor onderzoek vanwege het onvermogen om nauwkeurig te differentiëren van mogelijke maternale celbesmetting.

Voor het omgaan met een miskraam of zwangerschapsafbreking (TOP) bij verlies in het eerste trimester, is echogeleide handmatige vacuümaspiratie (USG-MVA) een van de behandelingsopties. USG-MVA voor de behandeling van vroeg zwangerschapsverlies wordt al vele decennia gebruikt. Er is gemeld dat USG-MVA veiliger en kosteneffectiever is en gepaard gaat met een kortere ziekenhuisopnametijd en -kosten dan chirurgische evacuatie onder algemene anesthesie [21, 22]. USG-MVA is een chirurgische techniek van zuigcurettage. Het wordt uitgevoerd met behulp van een in de hand gehouden vacuümbron (een injectiespuit met cilinder en plunjer) die is bevestigd aan een baarmoedercanule [23, 24]. Het USG-MVA-apparaat werkt door de baarmoederinhoud via de canule in de injectiespuit te zuigen. Bovendien kan het product van conceptie afgeleid van USG-MVA worden verzonden voor karyotyperingsanalyse.