Tutkimus hedelmöitystuotteesta, joka on johdettu ultraääniohjatusta manuaalisesta tyhjiöimusta

Varhainen raskauden menetys on hyvin yleistä, noin joka neljäs nainen kokee keskenmenon elämänsä aikana [1]. Raskauden menetyksen etiologia on edelleen suurelta osin tuntematon, vaikka geneettisiä, anatomisia, endokrinologisia ja immunologisia poikkeavuuksia on havaittu [2].

Tiedetään, että alkion/sikiön kromosomipoikkeamat vaikuttivat noin 50 prosenttiin varhaisen raskauden menetyksestä, joista 60–70 prosenttia oli aneuploidioita, ja ne voidaan suurelta osin havaita nykyisellä kultastandardin mukaisella karyotyypitysmenetelmällä, jota useat kansainväliset järjestöt suosittelevat. Perinteisen karyotyypityksen haittoja ovat kuitenkin viljelyn epäonnistumisen riski, äidin solukontaminaation (MCC), rajallinen havaitsemisresoluutio (5-10 Mb) ja spesifisten solulinjojen differentiaalinen kasvu, jotka voivat haitata geneettisten poikkeavuuksien, erityisesti mosaiikkisten, diagnosointia. Muita geneettisiä tekijöitä karyotyypityksen erottelukyvyn lisäksi ei ole tutkittu hyvin.

Seuraavan sukupolven sekvensointi (NGS) on tuonut geneettisen testauksen uusille rajoille ja laajentanut havaittavien genomimuunnosten valikoimaa. Lisäksi sen merkittävä kustannusten aleneminen vuosien mittaan on helpottanut geneettisen diagnostisen testauksen toteuttamista. Räätälöity matalan lukusyvyyden genomin sekvensoinnin analyyttinen putkistomme, nimittäin alipäästö genomin sekvensointi (GS), mahdollistaa tehokkaan ja kustannustehokkaan genominlaajuisten kopiolukumuunnosten (CNV:t, >50 kb) ja matalan tason kromosomaalisten mosaiikkien havaitsemisen ( niinkin alhainen kuin 10 %). Lisäksi kryptisten rakenteellisten uudelleenjärjestelyjen, heterotsygoottisuuden (AOH) puuttumisen ja yhden nukleotidin variantin (SNV) roolit ymmärrettiin vähemmän nykyisissä tutkimuksissa.

Hongkongin kiinalaisen yliopiston Prenatal Genetic Diagnostic Laboratoryssa on jo perustettu ja validoitu useita eri muunnelmiin kohdistettuja sekvensointialustojen versioita, mukaan lukien FetalSeq, ChromoSeq ja 30xWGS.

Ihmisen kohdun limakalvon ja desiduaalikudokset, jotka sisältävät lukemattomia immuuni- ja tulehduspopulaatioita [3-4], ovat immunologisesti dynaamisia. Kuukautiskierron varhaisessa proliferatiivisessa vaiheessa T-solut ovat runsain kohdun limakalvon leukosyyttipopulaatio, mutta ne vähenevät 20 prosenttiin kaikista stroomaleukosyyteistä raskauden alkuvaiheessa [5]. Makrofageja esiintyy myös kohdun limakalvon kudoksissa kuukautiskierron kaikissa vaiheissa, mutta niitä on eniten myöhään erittyvässä kohdun limakalvossa ja desiduaalikudoksissa raskauden alkuvaiheessa [6]. Yleisin (70 %) stromaalisten leukosyyttien populaatiosta, joka havaitaan myöhäisessä erittyvässä kohdun limakalvossa ja desiduassa normaalin alkuraskauden aikana, ovat suurirakeisia lymfosyyttejä (LGL), joilla on ainutlaatuinen fenotyyppi: CD56++, CD16-, CD57-, CD2±, CD38±, CD3-, CD4-, CD8- [7-10]. CD56+-solujen keskimääräisen määrän lisääntymistä on raportoitu toistuvien keskenmenojen saaneiden naisten erittävässä kohdun limakalvossa [11].

Hypoteesi, että tasapaino T-solujen alajoukkojen välillä (ts. CD4+- ja CD8+-solut) vaikuttavat onnistuneen raskauden ylläpitämiseen, on kiistanalainen. Joissakin tutkimuksissa ei ole raportoitu eroa T-solualaryhmien osuuksien välillä joko erittävässä kohdun limakalvossa tai ensimmäisen raskauskolmanneksen deciduassa naisilla, joilla on ollut toistuva raskauden menetys verrattuna normaaleihin kontrolleihin; kun taas toiset ovat kuvanneet siirtymistä kohti korkeampaa CD8+ T-solujen suhdetta kohdun limakalvon biopsioissa naisilta, joilla on ollut toistuva raskauden menetys [12-15].

T-solupopulaatioiden aktivaatiotila voi tarjota toisen indikaattorin soluimmuniteetista, joka saattaa olla osallisena raskauden menetykseen. IL-2-reseptorin on raportoitu puuttuvan T-soluista normaaleissa ensimmäisen raskauskolmanneksen desiduaalisissa kudoksissa käyttämällä immunohistokemiallisia tekniikoita [16]; virtaussytometriaa käyttämällä on kuitenkin tunnistettu CD3+CD25+-aktivoituja T-soluja detsiduaalikudoksesta [17]. CD69 on toinen varhainen aktivaatiomarkkeri, joka ilmentyy T-solujen pinnalla [18]. Osa T-soluista ilmentää tätä markkeria konstitutiivisesti koko kuukautiskierron ajan ja normaalin alkuraskauden aikana.

Noin 60 % spontaaneista aborteista johtuu numeerisesti epänormaaleista kromosomeista kehittyvässä käsitteessä [19], mutta tähän mennessä rajalliset tiedot keskenmenonneiden naisten decidua-immunologisista ilmiöistä ovat vertailleet heidän tietojaan hyvin määriteltyihin käsitteisiin kuuluviin kromosomipoikkeavuuksiin. Tämä on tärkeää, koska kromosomipoikkeavuus trisomia 16, jota esiintyy 26 %:ssa kaikista spontaaneista aborteista, ei sovi yhteen elämän kanssa [20] ja olisi siten kiistaton syy spontaaniin aborttiin. Siksi tutkimuksemme tarkoituksena oli selvittää, erosivatko deciduaaliset leukosyyttien alapopulaatiot ja niihin liittyvät aktivaatiomarkkerit naisilla, joilla on keskenmeno joko trisomia 16 (47XY+16 tai 47XX+16) verrattuna kromosomaalisesti normaaliin mieskonseptukseen (46XY). ja verrattuna raskauden ikää vastaaviin kudoksiin. Näytteitä oletettavasti normaaleista naiskäsityksistä (46XX) ei valittu tutkimukseen, koska niitä ei kyetty erottamaan tarkasti mahdollisesta äidin solukontaminaatiosta.

Ultraääniohjattu manuaalinen tyhjiöimu (USG-MVA) on yksi hoitovaihtoehdoista keskenmenon tai raskauden keskeytymisen (TOP) hoitoon ensimmäisen raskauskolmanneksen aikana. USG-MVA:ta varhaisen raskauden menetyksen hoitoon on käytetty vuosikymmeniä. On raportoitu, että USG-MVA on turvallisempi, kustannustehokkaampi ja siihen liittyy lyhyempi sairaalahoitoaika ja -kustannukset kuin kirurginen evakuointi yleisanestesiassa [21, 22]. USG-MVA on imukyretoinnin kirurginen tekniikka. Se suoritetaan käyttämällä kädessä pidettävää tyhjiölähdettä (ruisku, jossa on piippu ja mäntä), joka on kiinnitetty kohdun kanyyliin [23, 24] USG-MVA-laite toimii imemällä kohdun sisällön kanyylin kautta ruiskuun. Lisäksi USG-MVA:sta johdettu hedelmöitystuote voidaan lähettää karyotyyppianalyysiin.