Estudo do Produto da Concepção Derivado da Aspiração Manual a Vácuo Guiada por Ultrassom

A perda precoce da gravidez é muito comum, aproximadamente uma em cada quatro mulheres sofrerá um aborto espontâneo em sua vida [1]. A etiologia da perda gestacional permanece amplamente desconhecida, embora anormalidades genéticas, anatômicas, endocrinológicas e imunológicas tenham sido implicadas [2].

Sabe-se que as aberrações cromossômicas embrionárias/fetais contribuíram para aproximadamente 50% das perdas gestacionais precoces, entre as quais 60-70% eram aneuploidias, em grande parte podem ser detectadas pela abordagem atual de cariótipo padrão-ouro recomendada por várias sociedades internacionais. No entanto, as desvantagens do cariótipo convencional incluem o risco de falha na cultura, contaminação de células maternas (MCC), resolução de detecção limitada (5-10 Mb) e crescimento diferencial de linhagens celulares específicas que podem dificultar o diagnóstico de anormalidades genéticas, principalmente mosaicismos. Fatores genéticos adicionais além da resolução do cariótipo não são bem estudados.

O sequenciamento de próxima geração (NGS) trouxe testes genéticos para novas fronteiras, expandindo o escopo de variantes genômicas detectáveis. Além disso, sua significativa redução de custos ao longo dos anos facilitou a implementação de testes de diagnóstico genético. Nosso pipeline analítico personalizado de sequenciamento de genoma de leitura rasa, ou seja, sequenciamento de genoma de passagem baixa (GS), permite a detecção eficiente e econômica de variantes de número de cópias em todo o genoma (CNVs, > 50 kb) e mosaicismos cromossômicos de baixo nível ( tão baixo quanto 10%). Além disso, os papéis dos rearranjos estruturais crípticos, ausência de heterozigosidade (AOH) e variante de nucleotídeo único (SNV) foram menos compreendidos nos estudos atuais.

Várias versões de plataformas de sequenciamento voltadas para diferentes variantes já foram estabelecidas e validadas no Laboratório de Diagnóstico Genético Pré-natal da Universidade Chinesa de Hong Kong, incluindo FetalSeq, ChromoSeq e 30xWGS.

Os tecidos endometrial e decidual humanos, contendo uma miríade de populações imunes e inflamatórias [3-4], são imunologicamente dinâmicos. Na fase proliferativa inicial do ciclo menstrual, as células T são a população leucocitária mais abundante no endométrio, mas diminuem para 20% de todos os leucócitos estromais durante o início da gravidez [5]. Os macrófagos também estão presentes nos tecidos endometriais durante todas as fases do ciclo menstrual, mas são mais abundantes no endométrio secretor tardio e nos tecidos deciduais durante o início da gravidez [6]. A população mais abundante (70%) de leucócitos estromais observada no endométrio secretor tardio e na decídua durante o início da gravidez normal são grandes linfócitos granulares (LGL) com o fenótipo único: CD56++, CD16-, CD57-, CD2±, CD38±, CD3-, CD4-, CD8- [7-10]. Números médios aumentados de células CD56+ foram relatados no endométrio secretor de mulheres com abortos recorrentes [11].

A hipótese de que o equilíbrio entre os subconjuntos de células T (ou seja, células CD4+ e CD8+) desempenha um papel na manutenção de uma gravidez bem-sucedida é controversa. Alguns estudos não relataram diferenças entre as proporções de subconjuntos de células T no endométrio secretor ou na decídua do primeiro trimestre de mulheres com história de perda gestacional recorrente em comparação com controles normais; enquanto outros descreveram uma mudança em direção a uma proporção mais alta de células T CD8+ em biópsias endometriais de mulheres com história de perda gestacional recorrente [12-15].

O status de ativação das populações de células T pode fornecer outro indicador de imunidade celular potencialmente envolvida na perda da gravidez. Foi relatado que o receptor de IL-2 está ausente nas células T em tecidos deciduais normais do primeiro trimestre usando técnicas imuno-histoquímicas [16]; no entanto, usando citometria de fluxo, células T ativadas CD3+CD25+ foram identificadas em tecido decidual [17]. CD69 é outro marcador de ativação precoce expresso na superfície das células T [18]. Uma proporção de células T expressa constitutivamente este marcador ao longo do ciclo menstrual e no início da gravidez normal.

Aproximadamente 60% dos abortos espontâneos são atribuíveis a cromossomos numericamente anormais no concepto em desenvolvimento [19], mas dados limitados até o momento abordando fenômenos imunológicos na decídua de mulheres abortadas compararam seus dados relativos a anormalidades cromossômicas bem definidas pertencentes a conceptos. Isso é importante, pois a anormalidade cromossômica trissomia 16, que ocorre em 26% de todos os abortos espontâneos, é incompatível com a vida [20] e, portanto, seria uma causa indiscutível de aborto espontâneo. Portanto, o objetivo do nosso estudo foi determinar se as subpopulações de leucócitos deciduais e seus marcadores de ativação associados eram diferentes entre mulheres com aborto espontâneo de um concepto com trissomia 16 (47XY+16 ou 47XX+16) em comparação com um concepto masculino cromossomicamente normal (46XY) e comparado com tecidos deciduais da mesma idade gestacional. Amostras de conceptos femininos presumivelmente normais (46XX) não foram escolhidas para estudo devido à incapacidade de diferenciar com precisão de possível contaminação de células maternas.

Para lidar com aborto espontâneo ou interrupção da gravidez (TOP) na perda do primeiro trimestre, a aspiração manual a vácuo guiada por ultrassom (USG-MVA) é uma das opções de tratamento. O USG-MVA para o tratamento da perda precoce da gravidez tem sido usado por muitas décadas. Foi relatado que USG-MVA é mais seguro, mais econômico e está associado a menor tempo de hospitalização e custo do que a evacuação cirúrgica sob anestesia geral [21, 22]. USG-MVA é uma técnica cirúrgica de curetagem por sucção. É realizado usando uma fonte de vácuo manual (uma seringa com cilindro e êmbolo) conectada a uma cânula uterina [23, 24]. O dispositivo USG-MVA funciona aspirando o conteúdo uterino através da cânula para a seringa. Além disso, o produto da concepção derivado do USG-MVA pode ser enviado para análise de cariótipo.