Zlepšený účinek endoteliálních buněk jaterních (+) s nedostatkem jaterních (+) s nedostatkem MERTK na nealkoholickou steatohepatitidu

I. Studijní pozadí nealkoholické mastné onemocnění jater (NAFLD) se stalo celosvětově jednou z nejčastějších poruch jater [1]. Navzdory své vysoké incidenci a závažnosti v současné době neexistují žádná účinná terapeutická činidla. Existující léčba se zaměřuje na symptomatickou úlevu, jako je hepatoprotekce a redukce enzymu, spíše než na řešení základní patogeneze [2]. Proto je objasnění mechanismů řídí progresi nealkoholické steatohepatitidy (NASH) a jaterní fibrózy související s NAFLD a má zásadní strategický význam, což má významný strategický význam.

1. Role LSEC v patogenezi NAFLD:

   Játvní sinusové endoteliální buňky (LSEC), primární složky jaterního sinusového endotelu, tvoří fyzickou bariéru regulující výměnu látky mezi jaterní parenchym a oběh. Jako vysoce specializované endoteliální buňky (ECS) a nejhojnější neparenchymální buňky (NPC) v játrech hrají LSEC klíčové role v jaterní patofyziologii [3-4]. Cílení funkce LSEC představuje slibný přístup ke zmírnění progrese a komplikací NAFLD.

2. Heterogenní transkriptomické rysy subpopulací LSEC v NAFLD:

   Jednobuněčné sekvenování RNA (ScRAN-SEQ) umožňuje amplifikaci a sekvenování genomu na úrovni jedné buňky. V játrech hepatocyty (HCS) a NPC vykazují výraznou transkriptomickou heterogenitu, podporují metabolickou a funkční zonaci. To zdůrazňuje potenciál analýzy s jedním buňkami při porozumění onemocněním jater [5]. Studie ScRAN-Seq na LSEC v NAFLD však zůstávají neprozkoumané.

3. Hypotéza: C-KIT (+)/GAS6 (-)-subpopulace LSEC zhoršuje NAFLD přes plyn6/MERTK zprostředkovanou regulaci mitofagie Pink1:

Endoteliální progenitorové buňky odvozené od kostní dřeně (EPCS), označené C-KIT (CD117), mohou exprimovat C-KIT v ECS za patologických podmínek [6]. Gas6, ligand pro receptory TAM (Tyro3, ​​AXL, MERTK), aktivuje po proudu signalizační kaskády regulující migraci buněk, zánět, přežití a mitofagii [7]. V NAFLD vykazuje GAS6/MERTK role specifické pro buňky [8-10]: protizánětlivé v jaterních makrofázích; Pro-fibrotické v jaterních hvězdných buňkách (HSC); Ochranné v hepatocytech (HCS). Role plynu6/mertk v LSEC během NAFLD však zůstává neznámá. Mitochondriální dysfunkce je charakteristickým znakem NAFLD [11] a zhoršená mitofagie (např. Nedostatek Pink1) zhoršuje zánět jater, steatózu a fibrózu [12]. Nové důkazy naznačují, že Gas6/MERTK zvyšuje mitofagii pro zachování mitochondriální funkce. Například myši Mertk-/- vykazují mitochondriální dysfunkci kardiomyocytů [13] a Gas6 podporuje mitofágii [14].

Naše předběžná data ScRAN-Seq z HFD/ND myší identifikovala jedinečnou subpopulaci LSEC C-KIT (+)/GAS6 (-)-LSEC. Tyto LSEC vyvolaly poškození mitofagie v kokultovaných HCS/HSC, které se projevily jako mitochondriální stárnutí, oxidační stres, aktivace HSC, ukládání lipidů HC a zánět. Zkoumání toho, jak tato subpopulace řídí progresi NAFLD, představí nové patofyziologické mechanismy a terapeutické cíle, které tvoří základ této studie.

Ii. Cíle studie k objasnění hladin exprese C-KIT a GAS6/MERTK ligand-receptorových párů v jaterních tkáních u pacientů s NAFLD.

Iii. Studijní postupy

(1) Kritéria pro zařazení a vyloučení

1. Kritéria pro zařazení: Diagnóza NAFLD na pokyny pro prevenci a léčbu nealkoholických mastných jater (vydání 2018). Věk 18-65 let.
2. Vylučovací kritéria: cirhóza (kompenzovaná nebo dekompenzovaná), hepatocelulární karcinom, aktivní virová hepatitida (HBV, HCV), primární biliární cholangitida, primární sklerózující cholangitida, nedávná historie užívání drog, alkohol pro ženy a den pro ženy, současná komora, nespírající komora.

(2) Návrh studie

1. Sběr biopsie jater a tkání:

   Ultrazvuková biopsie jater u 6 pacientů s NAFLD. Histopatologické hodnocení (HE, barvení Masson) pro Nash a fibrózu (NAS a Scheuer bodování). Sběr klinických dat a skladování jater tkání (-80 ° C).

2. Analýza exprese C-KIT a MERTK:

Imunofluorescenční spoluzaklačení jaterních tkání. 3. Statistická analýza: Porovnejte hladiny exprese C-KIT a MERTK u mírných a závažných pacientů s NAFLD.

(3) Zápis a pracovní postup

1. Sběr údajů o základní linii:

   ①demografické a klinické parametry: jméno, pohlaví, věk, etnicita, datum narození, výška, hmotnost, nástup nemoci, kontaktní informace.

   ② Laboratorní testy: CBC, ALT, AST, TBIL, TG, cholesterol, glukóza, celkový protein, albumin.

   ③ Klinická hodnocení: krevní tlak, BMI, břišní ultrazvuk, fibroscan.

2. Protokol biopsie:

   • Ultrazvuková řízená biopsie jater do 1 měsíce od zápisu. Požadavky na vzorky vzoru: ≥ 3 mm průměr, délka 5-8 mm. ③Storage: -80 ° C pro analýzu genu C -KIT a MERTK.

IV. Očekávané výsledky objasňují regulační vztah mezi C-KIT (+) LSEC a signální dráhou Gas6-Mertk v jaterních tkáních pacienta NAFLD.