Die durchlebende Wirkung von C-Kit (+) -Nepatik-Endothelzellen mit MERTK-Mangel bei nichtalkoholischer Steatohepatitis

I. Untersuchung des Hintergrunds Nichtalkoholische Fettlebererkrankung (NAFLD) ist weltweit zu einer der häufigsten Lebererkrankungen geworden [1]. Trotz seiner hohen Inzidenz und Schwere gibt es derzeit keine wirksamen therapeutischen Wirkstoffe. Bestehende Behandlungen konzentrieren sich auf symptomatische Linderung wie Hepatoprotektion und Enzymreduktion, anstatt die zugrunde liegende Pathogenese zu behandeln [2]. Daher ist die Aufklärung der Mechanismen, die das Fortschreiten der NAFLD-bezogenen alkoholfreien Steatohepatitis (NASH) und der Leberfibrose vorantreiben, entscheidend für die Entwicklung vorbeugender, minderwertiger oder sogar kurativer Strategien, was eine signifikante strategische Bedeutung hat.

1. Rolle von LSECs in der NAFLD -Pathogenese:

   Leber sinusförmige Endothelzellen (LSECs), die primären Komponenten des hepatischen Sinus -Endothels, bilden eine physikalische Barriere, die den Substanzaustausch zwischen dem Leberparenchym und der Zirkulation reguliert. Als hochspezialisierte Endothelzellen (ECS) und die am häufigsten vorkommenden nicht-parenchymalen Zellen (NPCs) in der Leber spielen LSECs eine zentrale Rolle bei der hepatischen Pathophysiologie [3-4]. Das Targeting der LSEC -Funktion stellt einen vielversprechenden Ansatz zur Minderung der NAFLD -Fortschritte und -komplikationen dar.

2. Heterogene transkriptomische Merkmale von LSEC -Subpopulationen in NAFLD:

   Die Single-Cell-RNA-Sequenzierung (SCRNA-seq) ermöglicht eine genomweite Amplifikation und Sequenzierung auf Einzelzellenebene. In der Leber weisen Hepatozyten (HCs) und NPCs eine ausgezeichnete transkriptomische Heterogenität auf, untermauerten Stoffwechsel- und Funktionszonation. Dies unterstreicht das Potenzial der Einzelzellanalyse beim Verständnis von Lebererkrankungen [5]. SCRNA-Seq-Studien zu LSECs in NAFLD bleiben jedoch unerforscht.

3. Hypothese: C-Kit (+)/Gas6 (-)-LSEC-Subpopulation verschlimmert die NAFLD über Gas6/MERTK-vermittelte Regulation der Pink1-Mitophagie:

Aus dem Knochenmark abgeleitete endotheliale Vorläuferzellen (EPCs), gekennzeichnet durch C-Kit (CD117), können C-KIT unter pathologischen Bedingungen in ECs exprimieren [6]. Gas6, ein Ligand für TAM -Rezeptoren (Tyro3, ​​AXL, MERTK), aktiviert die nachgeschalteten Signalkaskaden, die die Zellmigration, die Entzündung, das Überleben und die Mitophagie regulieren [7]. In NAFLD weist Gas6/MERTK zellspezifische Rollen auf [8-10]: entzündungshemmend in hepatischen Makrophagen; Profibrotisch in hepatischen Sternzellen (HSCs); Schutz in Hepatozyten (HCS). Die Rolle von Gas6/MERTK in LSECs während der NAFLD ist jedoch unbekannt. Die mitochondriale Dysfunktion ist ein Kennzeichen von NAFLD [11], und eine beeinträchtigte Mitophagie (z. B. Pink1 -Mangel) verschlimmert die Leberentzündung, Steatose und Fibrose [12]. Aufkommende Nachweise deuten darauf hin, dass Gas6/MERTK die Mitophagie erhöht, um die Mitochondrienfunktion zu erhalten. Zum Beispiel zeigen MERTK-/- Mäuse eine kardiomyozyten mitochondriale Dysfunktion [13], und Gas6 fördert die Mitophagie [14].

Unsere vorläufigen SCRNA-Seq-Daten von HFD/ND-Mäusen identifizierten eine eindeutige C-Kit (+)/Gas6 (-)-LSEC-Subpopulation. Diese LSECs induzierten eine Beeinträchtigung der Mitophagie bei co-kultivierten HCS/HSCs, die sich als mitochondriale Seneszenz, oxidativen Stress, HSC-Aktivierung, HC-Lipidablagerung und Entzündung manifestieren. Durch die Untersuchung, wie diese Subpopulation das NAFLD -Fortschreiten fördert, wird neuartige pathophysiologische Mechanismen und therapeutische Ziele vorgestellt und die Grundlage dieser Studie bilden.

Ii. Studienziele zur Aufklärung der Expressionsniveaus von C-Kit- und Gas6/MERTK-Ligandenrezeptorpaaren in Lebergeweben von NAFLD-Patienten.

III. Studienverfahren

(1) Einschluss- und Ausschlusskriterien

1. Einschlusskriterien: NAFLD-Diagnose gemäß Richtlinien zur Prävention und Behandlung von nichtalkoholischen Fettlebererkrankungen (Ausgabe 2018). Alter 18-65 Jahre.
2. Exclusion Criteria: Cirrhosis (compensated or decompensated), hepatocellular carcinoma, active viral hepatitis (HBV, HCV), primary biliary cholangitis, primary sclerosing cholangitis, recent history of illicit drug use, alcohol intake≥20 g/day for women and ≥30 g/day for men, current pregnancy or breastfeeding, severe comorbidities.

(2) Studiendesign

1. Leberbiopsie und Gewebesammlung:

   Ultraschallgeführte Leberbiopsie bei 6 NAFLD-Patienten. Histopathologische Bewertung (er, Masson -Färbung) für Nash und Fibrose (NAS und Scheuer Scoring). Klinische Datenerfassung und Lebergewebespeicherung (-80 ° C).

2. Expressionsanalyse von C-Kit und MERTK:

Immunfluoreszenz-Co-Färbung von Lebergeweben. 3. Statistische Analyse: Vergleiche C-Kit- und MERTK-Expressionsniveaus bei leichten und schweren NAFLD-Patienten.

(3) Einschreibung und Arbeitsablauf

1. Basisdatenerfassung:

   ①Demografische und klinische Parameter: Name, Geschlecht, Alter, ethnische Zugehörigkeit, Geburtsdatum, Größe, Gewicht, Erkrankung, Kontaktinformationen.

   ② Labortests: CBC, ALT, AST, TBIL, TG, Cholesterin, Glukose, Gesamtprotein, Albumin.

   ③klinische Bewertungen: Blutdruck, BMI, Bauchultraschall, Fibroscan.

2. Biopsieprotokoll:

   • Ultraschallgeführte perkutane Leberbiopsie innerhalb von 1 Monat nach der Einschreibung. ②Tissue-Probe Anforderungen: ≥3 mm Durchmesser, 5-8 mm Länge. ③Storage: -80 ° C für C -Kit- und MERTK -Genanalyse.

Iv. Die erwarteten Ergebnisse klären die regulatorische Beziehung zwischen C-Kit (+) LSECs und dem Gas6-MERTK-Signalweg im NAFLD-Patienten-Lebergewebe.