C-Kit (+) -maksan endoteelisolujen parannusvaikutus Mertkin puutoksella alkoholittomalla steatoHepatiittilla

I. Tutkimustausta alkoholittomat rasvamaksasairaudet (NAFLD) on tullut yksi yleisimmistä maksa-häiriöistä maailmanlaajuisesti [1]. Huolimatta suuresta esiintyvyydestään ja vakavuudestaan, tehokkaita terapeuttisia aineita ei tällä hetkellä ole. Nykyiset hoidot keskittyvät oireenmukaiseen helpotukseen, kuten hepatoprotiointiin ja entsyymien vähentämiseen sen sijaan, että puututaan taustalla olevaan patogeneesiin [2]. Siksi NAFLD: hen liittyvän alkoholittoman steatohepatiitin (NASH) ja maksan fibroosin etenemistä edistävien mekanismien selvittäminen on kriittistä ennaltaehkäisevien, parantavien tai jopa parantavien strategioiden kehittämiselle, jolla on merkittävä strateginen merkitys.

1. LSEC: n rooli NAFLD -patogeneesissä:

   Maksan sinimuotoiset endoteelisolut (LSEC), maksan sinimuotoisen endoteelin ensisijaiset komponentit, muodostavat fyysisen esteen, joka säätelee aineenvaihtoa maksan parenkyyman ja verenkierron välillä. Erittäin erikoistuneina endoteelisoluina (EC) ja eniten maksassa olevia ei-perenyymisiä soluja (NPC), LSEC: llä on keskeinen rooli maksan patofysiologiassa [3-4]. Kohdistaminen LSEC -funktiossa edustaa lupaavaa lähestymistapaa NAFLD: n etenemisen ja komplikaatioiden lieventämiseksi.

2. LSEC -alaryhmien heterogeeniset transkriptiset piirteet NAFLD: ssä:

   Yksisoluinen RNA-sekvensointi (SCRNA-Seq) mahdollistaa genomin laajuisen monistuksen ja sekvensoinnin yksisoluisella tasolla. Maksassa hepatosyytteillä (HCS) ja NPC: llä on merkitty transkriptillinen heterogeenisyys, taustalla oleva metabolinen ja funktionaalinen vyöhyke. Tämä korostaa yksisoluisen analyysin potentiaalia maksasairauksien ymmärtämisessä [5]. SCRNA-seq-tutkimuksia LSEC: stä NAFLD: ssä ei kuitenkaan ole tutkittu.

3. Hypoteesi: C-Kit (+)/Gas6 (-)-LSEC-alaryhmä pahentaa NAFLD: tä PINK1-mitofagian Gas6/Mertk-välitteisen säätelyn kautta:

C-KIT: llä (CD117) merkitty luuytimestä johdetut endoteelisolut (EPC) voivat ekspressoida C-KIT: ää ECS: ssä patologisissa olosuhteissa [6]. Gas6, ligandi TAM -reseptoreille (Tyro3, ​​AxL, Mertk), aktivoi alavirran signalointikaskadit, jotka säätelevät solujen migraatiota, tulehdusta, eloonjäämistä ja mitofagiaa [7]. NAFLD: ssä Gas6/Mertk osoittaa soluspesifisiä rooleja [8-10]: anti-inflammatorinen maksan makrofageissa; Pro-fibroottinen maksasoluissa (HSC); Suojaa hepatosyytteissä (HCS). Gas6/Mertkin rooli LSEC: ssä NAFLD: n aikana on kuitenkin tuntematon. Mitokondrioiden toimintahäiriöt ovat NAFLD: n [11] tunnusmerkki, ja heikentynyt mitofagia (esim. Pink1 -puute) pahentaa maksan tulehdusta, steatoosia ja fibroosia [12]. Esitetyt todisteet viittaavat siihen, että Gas6/Mertk parantaa mitofagiaa mitokondrioiden toiminnan säilyttämiseksi. Esimerkiksi Mertk-/- hiirillä on kardiomyosyyttien mitokondrioiden toimintahäiriöitä [13], ja Gas6 edistää mitofagiaa [14].

HFD/ND-hiirten alustavat SCRNA-seq-tietomme tunnistivat ainutlaatuisen C-Kit (+)/Gas6 (-)-LSEC-alaryhmän. Nämä LSEC: t indusoivat mitofagian heikkenemisen yhteisviljeltyissä HCS/HSC: ssä, jotka ilmenevät mitokondrioiden vanhenemisina, oksidatiivisena stressinä, HSC-aktivoituna, HC-lipidien laskeutumiseen ja tulehdukseen. Tutkimalla, kuinka tämä alaryhmä ajaa NAFLD -etenemistä, paljastaa uusia patofysiologisia mekanismeja ja terapeuttisia kohteita muodostaen tämän tutkimuksen perustan.

II. Tutkimuksen tavoitteet C-Kit- ja Gas6/Mertk-ligandireseptoriparien ekspressiotasojen selvittämiseksi NAFLD-potilaiden maksakudoksissa.

III. Tutkimusmenettelyt

(1) sisällyttämis- ja poissulkemiskriteerit

1. Sisällyttämiskriteerit: NAFLD-diagnoosi ohjeiden kohdalla alkoholittoman rasvamaksataudin (2018 painos) ehkäisyyn ja hoitoon. Ikä 18-65 vuotta.
2. Poissulkemiskriteerit: maksakirroosi (kompensoitu tai dekompensoitu), hepatosellulaarinen karsinooma, aktiivinen virushepatiitti (HBV, HCV), ensisijainen sappikolangiitti, primaarinen sklerosoiva kolangiitti, viimeaikainen historia laittomasta huumeiden käytöstä, alkoholin saannista 20 g/päivä naisille ja ≥30 g/päivä miehille, nykyinen raskaus tai ivasfeeding.

(2) tutkimuksen suunnittelu

1. Maksan biopsia ja kudoksen keräys:

   Ultraääniohjattu maksabiopsia 6 NAFLD-potilaalla. Histopatologinen arviointi (He, Masson -värjäys) Nashille ja fibroosille (NAS ja Scheuer -pisteytys). Kliinisen tiedonkeruu ja maksakudoksen varastointi (-80 ° C).

2. C-Kitin ja Mertkin ekspressioanalyysi:

Maksan kudosten immunofluoresenssijulkaisu. 3. Tilastollinen analyysi: Vertaa C-Kit- ja Mertk-ekspressiotasoja lievällä ja vakavilla NAFLD-potilailla.

(3) ilmoittautuminen ja työnkulku

1. Perustiedon keruu:

   ①Demografiset ja kliiniset parametrit: nimi, sukupuoli, ikä, etnisyys, syntymäaika, korkeus, paino, taudin alkaminen, yhteystiedot.

   ② Laboratoriotestit: CBC, ALT, AST, TBIL, TG, kolesteroli, glukoosi, kokonaisproteiini, albumiini.

   ③kliiniset arviot: verenpaine, BMI, vatsan ultraääni, fibroscan.

2. Biopsiaprotokolla:

   • Ultraääniohjattu perkutaaninen maksan biopsia yhden kuukauden kuluessa ilmoittautumisesta. ②Tissue-näytteen vaatimukset: ≥3 mm halkaisija, 5-8 mm pituus. ③Storage: -80 ° C C -Kit- ja Mertk -geenianalyysille.

Iv. Odotetut tulokset selventävät C-Kit (+) LSEC: n ja Gas6-Mertk-signalointireitin välistä sääntely-suhdetta NAFLD-potilaan maksan kudoksissa.