Poprawne działanie C-KIT (+) wątrobowych komórek śródbłonka z niedoborem MERTK na niealkoholowe zapalenie stłuszczeniowe

I. Badanie tła bezalkoholowa choroba wątroby tłuszczowej (NAFLD) stała się jednym z najbardziej rozpowszechnionych zaburzeń wątroby na całym świecie [1]. Pomimo wysokiej występowania i nasilenia nie ma obecnie skutecznych środków terapeutycznych. Istniejące leczenie koncentrują się na objawowej uldze, takich jak wątroba i redukcja enzymu, zamiast rozwiązać leżąca u podstaw patogenezę [2]. Dlatego wyjaśnienie mechanizmów napędzających postęp związanego z NAFLD bezalkoholowym zapaleniem stłuszczeniowego (NASH) i zwłóknienia wątroby ma kluczowe znaczenie dla opracowania strategii zapobiegawczych, wzmacniających, a nawet leczniczych, mające znaczące znaczenie strategiczne.

1. Rola LSEC w patogenezie NAFLD:

   Sinusoidalne komórki śródbłonka wątroby (LSEC), główne składniki śródbłonka sinusoidalnego wątrobowego, tworzą fizyczną wymianę substancji regulującej substancję między miąższem wątrobowym a krążeniem. Jako wysoce wyspecjalizowane komórki śródbłonka (EC) i najliczniejsze komórki nieparenchymalne (NPC) w wątrobie, LSEC odgrywają kluczową rolę w patofizjologii wątroby [3-4]. Kierowanie funkcji LSEC stanowi obiecujące podejście do złagodzenia postępu i powikłań NAFLD.

2. Heterogeniczne cechy transkryptomiczne subpopulacji LSEC w NAFLD:

   Sekwencjonowanie RNA z pojedynczą komórką (SCRNA-Seq) umożliwia amplifikację i sekwencjonowanie całego genomu na poziomie jednokomórkowym. W wątrobie hepatocyty (HCS) i NPC wykazują wyraźną heterogeniczność transkryptomiczną, leżąc u podstaw strefy metabolicznej i funkcjonalnej. Podkreśla to potencjał analizy jednokomórkowej w zrozumieniu chorób wątroby [5]. Jednak badania SCRNA-Seq dotyczące LSEC w NAFLD pozostają niezbadane.

3. Hipoteza: C-KIT (+)/GAS6 (-)-Subpopulacja LSEC zaostrza NAFLD poprzez regulację za pośrednictwem GAS6/MERTK mitofagii Pink1:

Śródbłonkowe komórki progenitorowe pochodzące ze szpiku kostnego (EPC), oznaczone przez C-KIT (CD117), mogą wyrażać C-KIT w ECS w warunkach patologicznych [6]. Gas6, ligand dla receptorów TAM (Tyro3, ​​AXL, MERTK), aktywuje dalsze kaskady sygnalizacyjne regulujące migrację komórek, zapalenie, przeżycie i mitofagię [7]. W NAFLD GAS6/MERTK wykazuje role specyficzne dla komórek [8-10]: przeciwzapalne w makrofagach wątrobowych; Pro-fibrotyczne w wątrobowych komórkach gwiaździstych (HSC); Ochrona w hepatocytach (HCS). Jednak rola GAS6/MERTK w LSEC podczas NAFLD pozostaje nieznana. Dysfunkcja mitochondriów jest znakiem rozpoznawczym NAFLD [11] i upośledzonej mitofagii (np. Niedobór Pink1) zaostrza zapalenie wątroby, stłuszczenie i zwłóknienie [12]. Pojawiające się dowody sugerują, że GAS6/MERTK zwiększa mitofagię w celu zachowania funkcji mitochondriów. Na przykład myszy MERTK-/- wykazują dysfunkcję mitochondrialną kardiomiocytów [13], a GAS6 promuje mitofagię [14].

Nasze wstępne dane SCRNA-Seq z myszy HFD/ND zidentyfikowały unikalną subpopulację C-KIT (+)/GAS6 (-)-LSEC. Te LSEC indukowały upośledzenie mitofagii w hodowani HC/HSC, objawiając się jako starzenie się mitochondriów, stres oksydacyjny, aktywację HSC, odkładanie lipidów HC i zapalenie. Badanie, w jaki sposób ta subpopulacja napędza postęp NAFLD, zaprezentuje nowe mechanizmy patofizjologiczne i cele terapeutyczne, stanowiąc podstawę tego badania.

Ii. Badane cele wyjaśniające poziomy ekspresji par C-KIT i GAS6/MERTK-receptor ligand w tkankach wątroby pacjentów z NAFLD.

Iii. Procedury badań

(1) kryteria włączenia i wykluczenia

1. Kryteria włączenia: Diagnoza NAFLD zgodnie z wytycznymi dotyczącymi zapobiegania i leczenia bezalkoholowej choroby wątroby stłuszczej (wydanie 2018). Wiek 18–65 lat.
2. Kryteria wykluczenia: marskość wątroby (zrekompensowana lub dekompensowana), rak wątrobowokomórkowy, aktywne wirusowe zapalenie wątroby (HBV, HCV), pierwotne zapalenie żółci dróg żółciowych, pierwotne zapalenie żółciowe, najnowsze nielegalne używanie narkotyków, spożycie alkoholu ≥20 g/dzień dla kobiet i ≥30 g day dla mężczyzn, bieżąca, ciężkie paliwo piersi.

(2) Projekt badania

1. Biopsja wątroby i kolekcja tkanek:

   Biopsja wątroby pod kontrolą ultradźwięków u 6 pacjentów z NAFLD. Ocena histopatologiczna (HE, Masson Garding) pod kątem Nasha i zwłóknienia (punktację NAS i Scheuer). Zbieranie danych klinicznych i przechowywanie tkanki wątroby (-80 ° C).

2. Analiza ekspresji C-KIT i MERTK:

Immunofluorescencja Badanie tkanek wątroby. 3. Analiza statystyczna: Porównaj poziomy ekspresji C-KIT i MERTK u pacjentów z łagodnymi i ciężkim NAFLD.

(3) Rejestracja i przepływ pracy

1. Bazowe gromadzenie danych:

   ① Parametry podawane i kliniczne: Imię, płeć, wiek, pochodzenie etniczne, data urodzenia, wysokość, waga, początek choroby, informacje kontaktowe.

   ② Testy laboratoryjne: CBC, ALT, AST, TBIL, TG, cholesterol, glukoza, białko całkowite, albumina.

   ③ Kliniczne oceny: ciśnienie krwi, BMI, ultradźwięki brzuszne, fibroskan.

2. Protokół biopsji:

   • Przeskórna biopsja wątroby pod przewinieniem ultradźwiękowym w ciągu 1 miesiąca od zapisania się. ② Wymagania próbki: ≥3 mm średnica, długość 5-8 mm. ③storage: -80 ° C dla analizy genów C -KIT i MERTK.

Iv. Oczekiwane wyniki wyjaśniają związek regulacyjny między LSEC C-KIT (+) a szlakiem sygnałowym GAS6-MERTK w tkankach wątroby pacjenta z NAFLD.