L'effetto migliorativo delle cellule endoteliali epatiche C-kit (+) con carenza di Mertk sulla steatoepatite non alcolica

I. Studio BACKGROUSE La malattia epatica grassa non alcolica (NAFLD) è diventata uno dei disturbi epatici più diffusi a livello globale [1]. Nonostante la sua alta incidenza e gravità, attualmente non esistono agenti terapeutici efficaci. I trattamenti esistenti si concentrano sul sollievo sintomatico, come l'epatoprotezione e la riduzione degli enzimi, piuttosto che affrontare la patogenesi sottostante [2]. Pertanto, chiarire i meccanismi che guidano la progressione della steatoepatite non alcolica correlata a NAFLD (NASH) e la fibrosi epatica è fondamentale per lo sviluppo di strategie preventive, migliorative o addirittura curative, con una significativa importanza strategica.

1. Ruolo degli LSEC nella patogenesi NAFLD:

   Le cellule endoteliali sinusoidali epatiche (LSEC), i componenti primari dell'endotelio sinusoidale epatico, formano uno scambio di sostanze di barriera fisica tra il parenchima epatico e la circolazione. Come cellule endoteliali altamente specializzate (ECS) e le cellule più abbondanti non parenchimali (NPC) nel fegato, gli LSEC svolgono ruoli fondamentali nella patofisiologia epatica [3-4]. Il targeting della funzione LSEC rappresenta un approccio promettente per mitigare la progressione e le complicazioni NAFLD.

2. Caratteristiche trascrittomiche eterogenee delle sottopopolazioni LSEC in NAFLD:

   Il sequenziamento dell'RNA a cella singola (SCRNA-seq) consente l'amplificazione e il sequenziamento a livello di genoma a livello di singola cellula. Nel fegato, gli epatociti (HCS) e gli NPC presentano marcata eterogeneità trascrittomica, sostenendo la zonazione metabolica e funzionale. Ciò evidenzia il potenziale dell'analisi a cellula singola nella comprensione delle malattie epatiche [5]. Tuttavia, gli studi SCRNA-seq sugli LSEC in NAFLD rimangono inesplorati.

3. Ipotesi: c-kit (+)/gas6 (-)-la sottopopolazione LSEC esacerba NAFLD tramite regolazione mediata da GAS6/Mertk della mitofagia Pink1:

Le cellule progenitrici endoteliali derivate dal midollo osseo (EPC), contrassegnate da C-Kit (CD117), possono esprimere C-Kit in ECS in condizioni patologiche [6]. GAS6, un ligando per i recettori TAM (Tyro3, ​​Axl, Mertk), attiva le cascate di segnalazione a valle che regolano la migrazione cellulare, l'infiammazione, la sopravvivenza e la mitofagia [7]. In NAFLD, Gas6/Mertk presenta ruoli specifici per cellule [8-10]: antinfiammatorio nei macrofagi epatici; Pro-fibrotico nelle cellule stellate epatiche (HSC); Protettivo negli epatociti (HCS). Tuttavia, il ruolo di GAS6/Mertk negli LSEC durante NAFLD rimane sconosciuto. La disfunzione mitocondriale è un segno distintivo di NAFLD [11] e la mitofagia compromessa (ad esempio, carenza di Pink1) aggrava l'infiammazione epatica, la steatosi e la fibrosi [12]. Le prove emergenti suggeriscono che Gas6/Mertk migliora la mitofagia per preservare la funzione mitocondriale. Ad esempio, i topi Mertk-/- mostrano la disfunzione mitocondriale di cardiomiociti [13] e GAS6 promuovono la mitofagia [14].

I nostri dati preliminari SCRNA-Seq da topi HFD/ND hanno identificato una sottopopolazione C-Kit (+)/Gas6 (-)-LSEC univoca. Questi LSEC hanno indotto la compromissione della mitofagia negli HC/HSC co-coltivati, manifestando come senescenza mitocondriale, stress ossidativo, attivazione dell'HSC, deposizione lipidica HC e infiammazione. Indagare su come questa sottopopolazione guida la progressione NAFLD presenterà nuovi meccanismi patofisiologici e obiettivi terapeutici, formando la base di questo studio.

Ii. Obiettivi di studio per chiarire i livelli di espressione delle coppie di recettori del ligando C-Kit e Gas6/Mertk nei tessuti epatici dei pazienti NAFLD.

Iii. Procedure di studio

(1) Criteri di inclusione ed esclusione

1. Criteri di inclusione: diagnosi NAFLD per linee guida per la prevenzione e il trattamento della malattia epatica grassa non alcolica (edizione 2018). Età 18-65 anni.
2. Criteri di esclusione: cirrosi (compensato o decommentato), carcinoma epatocellulare, epatite virale attiva (HBV, HCV), colangite biliare primaria, colangite sclerosante primaria, comorbite grave.

(2) Progettazione dello studio

1. Biopsia epatica e collezione di tessuti:

   Biopsia epatica guidata da ultrasuoni in 6 pazienti NAFLD. Valutazione istopatologica (He, Masson Coloration) per NASH e fibrosi (punteggio di NAS e SCHEUER). Raccolta di dati clinici e conservazione dei tessuti epatici (-80 ° C).

2. Analisi dell'espressione di C-kit e Mertk:

Immunofluorescenza co-colorazione dei tessuti epatici. 3. Analisi statistica: confrontare i livelli di espressione C-Kit e Mertk in pazienti NAFLD lievi e gravi.

(3) Iscrizione e flusso di lavoro

1. Raccolta di dati di base:

   ① Parametri demografici e clinici: nome, sesso, età, etnia, data di nascita, altezza, peso, insorgenza della malattia, informazioni di contatto.

   ② Test di laboratorio: CBC, ALT, AST, TBIL, TG, colesterolo, glucosio, proteina totale, albumina.

   ③ Valutazioni cliniche: pressione sanguigna, BMI, ultrasuoni addominali, fibroscan.

2. Protocollo di biopsia:

   • Biopsia epatica percutanea guidata da ultrasuoni entro 1 mese dall'iscrizione. ② Requisiti del campione di tag: ≥3 mm di diametro, 5-8 mm di lunghezza. ③Storage: -80 ° C per l'analisi del gene C -Kit e Mertk.

IV. I risultati attesi chiariscono la relazione regolatoria tra LSEC C-Kit (+) e la via di segnalazione GAS6-Mertk nei tessuti epatici del paziente NAFLD.