L'effet amélioratif des cellules endothéliales hépatiques C-kit (+) avec une carence en Mertk sur une stéatohépatite non alcoolique

I. Contexte de l'étude La maladie hépatique non alcoolique (NAFLD) est devenue l'un des troubles hépatiques les plus répandus dans le monde [1]. Malgré sa forte incidence et sa gravité, aucun agent thérapeutique efficace n'existe actuellement. Les traitements existants se concentrent sur le soulagement symptomatique, tels que l'hépatoprotection et la réduction des enzymes, plutôt que de traiter la pathogenèse sous-jacente [2]. Par conséquent, l'élucidation des mécanismes stimulant la progression de la stéatohépatite non alcoolique liée à la NAFLD (NASH) et de la fibrose hépatique est essentielle pour développer des stratégies préventives, améliorantes ou même curatives, détenant une importance stratégique importante.

1. Rôle des LSEC dans la pathogenèse de la NAFLD:

   Les cellules endothéliales sinusoïdales hépatiques (LSEC), les principaux composantes de l'endothélium sinusoïdal hépatique, forment un échange de substances de barrière physique entre le parenchyme hépatique et la circulation. En tant que cellules endothéliales hautement spécialisées (EC) et les cellules non parenchymateuses (NPC) les plus abondantes dans le foie, les LSEC jouent un rôle pivot dans la physiopathologie hépatique [3-4]. Le ciblage de la fonction LSEC représente une approche prometteuse pour atténuer la progression et les complications de la NAFLD.

2. Caractéristiques transcriptomiques hétérogènes des sous-populations LSEC dans NAFLD:

   Le séquençage d'ARN unique (SCRNA-SEQ) permet une amplification et un séquençage à l'échelle du génome au niveau unique. Dans le foie, les hépatocytes (HC) et les PNJ présentent une hétérogénéité transcriptomique marquée, sous-tend la zonation métabolique et fonctionnelle. Cela met en évidence le potentiel de l'analyse unique dans la compréhension des maladies hépatiques [5]. Cependant, les études SCRNA-Seq sur les LSEC dans la NAFLD restent inexplorées.

3. Hypothèse: c-kit (+) / gas6 (-) - La sous-population LSEC exacerbe le NAFLD via la régulation médiée par Gas6 / Mertk de la mitophagie Pink1:

Les cellules progénitrices endothéliales dérivées de la moelle osseuse (EPC), marquées par C-kit (CD117), peuvent exprimer le C-KIT dans les EC dans des conditions pathologiques [6]. Gas6, un ligand pour les récepteurs TAM (Tyro3, ​​AXL, MERTK), active les cascades de signalisation en aval, régulant la migration cellulaire, l'inflammation, la survie et la mitophagie [7]. Dans NAFLD, Gas6 / Mertk présente des rôles spécifiques aux cellules [8-10]: anti-inflammatoire dans les macrophages hépatiques; Pro-fibrotique dans les cellules stellaires hépatiques (CSH); Protecteur en hépatocytes (HC). Cependant, le rôle de Gas6 / Mertk dans les LSEC pendant la NAFLD reste inconnu. Le dysfonctionnement mitochondrial est une caractéristique de la NAFLD [11], et une altération de la mitophagie (par exemple, une carence en Pink1) exacerbe l'inflammation hépatique, la stéatose et la fibrose [12]. Les preuves émergentes suggèrent que Gas6 / Mertk améliore la mitophagie pour préserver la fonction mitochondriale. Par exemple, les souris Mertk - / - présentent un dysfonctionnement mitochondrial des cardiomyocytes [13] et Gas6 favorise la mitophagie [14].

Nos données préliminaires SCRNA-SEQ de souris HFD / ND ont identifié une sous-population C-Kit (+) / Gas6 (-) - LSEC unique. Ces LSEC ont induit une altération de la mitophagie dans les HC / HSC co-cultivés, se manifestant sous forme de sénescence mitochondriale, de stress oxydatif, d'activation du HSC, de dépôt lipidique HC et d'inflammation. L'étude de la façon dont cette sous-population entraîne une progression de la NAFLD dévoilera de nouveaux mécanismes physiopathologiques et des cibles thérapeutiques, formant la base de cette étude.

Ii Objectifs de l'étude pour élucider les niveaux d'expression des paires de C-Kit et Gas6 / Mertk-ligand-récepteur dans les tissus hépatiques des patients NAFLD.

Iii. Procédures d'étude

(1) Critères d'inclusion et d'exclusion

1. Critères d'inclusion: diagnostic de la NAFLD par lignes directrices pour la prévention et le traitement d'une maladie hépatique non alcoolique (édition 2018). 18 à 65 ans.
2. Critères d'exclusion: cirrhose (compensée ou décompensée), carcinome hépatocellulaire, hépatite virale active (VHB, VHC), cholangite biliaire primaire, cholangite sclérosante primaire, antécédents récents de consommation de drogues illicites, apport alcoolique ≥20 g / jour pour les femmes et ≥ 30 g / jour pour les hommes, la grossesse actuelle ou les feases du sein, la fief pour femmes et ≥ 30 jours pour les hommes, la grossesse actuelle ou les feasses du sein, la fief.

(2) la conception de l'étude

1. Biopsie du foie et collecte de tissus:

   Biopsie hépatique guidée par ultrasons chez 6 patients NAFLD. Évaluation histopathologique (He, Masson Tenage) pour Nash et Fibrose (NAS et SCHEUER SCORING). Collecte des données cliniques et stockage des tissus hépatiques (-80 ° C).

2. Analyse d'expression de C-Kit et Mertk:

Co-co-co-co-corsage des tissus hépatiques. 3. Analyse statistique: Comparez les niveaux d'expression C-KIT et Mertk chez les patients NAFLD légers et sévères.

(3) inscription et flux de travail

1. Collecte de données de base:

   ① paramètres démographiques et cliniques: nom, sexe, âge, origine ethnique, date de naissance, taille, poids, début de la maladie, coordonnées.

   ② Tests de laboratoire: CBC, ALT, AST, TBIL, TG, cholestérol, glucose, protéine totale, albumine.

   ③ Évaluations cliniques: pression artérielle, IMC, échographie abdominale, fibroscan.

2. Protocole de biopsie:

   • Biopsie hépatique percutanée guidée par ultrasons dans le mois suivant l'inscription. Exigences de l'échantillon de réissue: ≥3 mm de diamètre, longueur de 5 à 8 mm. ③Storage: -80 ° C pour l'analyse du gène C-KIT et Mertk.

Iv. Les résultats attendus clarifient la relation réglementaire entre les LSEC C-Kit (+) et la voie de signalisation GAS6-Mertk dans les tissus hépatiques du patient NAFLD.