Het verbeteringseffect van C-Kit (+) hepatische endotheelcellen met MERTK-deficiëntie op niet-alcoholische steatohepatitis

I. Studie Achtergrond Niet-alcoholische leververvetting (NAFLD) is wereldwijd een van de meest voorkomende leveraandoeningen geworden [1]. Ondanks zijn hoge incidentie en ernst, bestaan ​​er momenteel geen effectieve therapeutische middelen. Bestaande behandelingen richten zich op symptomatische verlichting, zoals hepatoprotectie en enzymreductie, in plaats van de onderliggende pathogenese aan te pakken [2]. Daarom is het ophelderen van de mechanismen die de progressie van NAFLD-gerelateerde niet-alcoholische steatohepatitis (NASH) en hepatische fibrose van cruciaal belang hebben voor het ontwikkelen van preventieve, verbetering van, verbeterende of zelfs curatieve strategieën, met een aanzienlijk strategisch belang.

1. Rol van LSEC's in NAFLD -pathogenese:

   Lever sinusoïdale endotheelcellen (LSEC's), de primaire componenten van het sinusvormige endotheel van de lever, vormen een fysieke barrière die de substantie -uitwisseling tussen het leverparenchym en de bloedsomloop reguleert. Als zeer gespecialiseerde endotheelcellen (EC's) en de meest voorkomende niet-parenchymcellen (NPC's) in de lever spelen LSEC's een cruciale rol in leverpathofysiologie [3-4]. Het richten van de LSEC -functie vertegenwoordigt een veelbelovende benadering om NAFLD -progressie en complicaties te verminderen.

2. Heterogene transcriptomische kenmerken van LSEC -subpopulaties in NAFLD:

   Single-cel RNA-sequencing (scRNA-seq) maakt genoombrede amplificatie en sequencing op het niveau van één cel mogelijk. In de lever vertonen hepatocyten (HCS) en NPC's een duidelijke transcriptomische heterogeniteit, die metabole en functionele zonatie onderbouwden. Dit benadrukt het potentieel van eencellige analyse bij het begrijpen van leverziekten [5]. ScrNA-seq-onderzoeken naar LSEC's in NAFLD blijven echter onontgonnen.

3. Hypothese: C-Kit (+)/Gas6 (-)-LSEC Subpopulatie verergert NAFLD via GAS6/MERTK-gemedieerde regulatie van Pink1-mitofagie:

Van beenmerg afgeleide endotheliale voorlopercellen (EPC's), gemarkeerd door C-Kit (CD117), kunnen C-Kit tot expressie brengen in EC's onder pathologische omstandigheden [6]. GAS6, een ligand voor TAM -receptoren (Tyro3, ​​Axl, Mertk), activeert stroomafwaartse signaalcascades die celmigratie, ontsteking, overleving en mitofagie reguleren [7]. In NAFLD vertoont GAS6/MERTK celspecifieke rollen [8-10]: ontstekingsremmend in hepatische macrofagen; Pro-fibrotisch in hepatische stellaire cellen (HSC's); Beschermend in hepatocyten (HCS). De rol van Gas6/MERTK in LSEC's tijdens NAFLD blijft echter onbekend. Mitochondriale disfunctie is een kenmerk van NAFLD [11], en verminderde mitofagie (bijv. Pink1 -deficiëntie) verergert leverontsteking, steatose en fibrose [12]. Opkomend bewijs suggereert dat GAS6/MERTK de mitofagie verbetert om de mitochondriale functie te behouden. Mertk-/- muizen vertonen bijvoorbeeld cardiomyocyten mitochondriale disfunctie [13], en GAS6 bevordert mitofagie [14].

Onze voorlopige scRNA-seq-gegevens van HFD/ND-muizen identificeerden een unieke C-Kit (+)/Gas6 (-)-LSEC-subpopulatie. Deze LSEC's induceerden mitofagie-stoornissen in co-gekweekte HCS/HSC's, die zich manifesteren als mitochondriale senescentie, oxidatieve stress, HSC-activering, HC-lipidenafzetting en ontsteking. Onderzoek naar hoe deze subpopulatie de NAFLD -progressie stimuleert, zal nieuwe pathofysiologische mechanismen en therapeutische doelen onthullen, waardoor de basis van deze studie wordt gevormd.

II. Studiedoelstellingen om de expressieniveaus van C-KIT- en GAS6/MERTK-ligand-receptorparen in leverweefsels van NAFLD-patiënten op te helderen.

Iii. Studieprocedures

(1) Inclusie- en uitsluitingscriteria

1. Inclusiecriteria: NAFLD-diagnose per richtlijnen voor de preventie en behandeling van niet-alcoholische leververvetting (editie 2018). Leeftijd 18-65 jaar.
2. Uitsluitingscriteria: cirrose (gecompenseerd of gedecompenseerd), hepatocellulair carcinoom, actieve virale hepatitis (HBV, HCV), primaire gal cholangitis, primaire sclerosen cholangitis, recente geschiedenis van illegale drugsgebruik, alcoholintroductie ≥20 g/dag voor vrouwen en ≥30 g/dag voor mannen, huidige zwangerschap of borstvoeding, ernstige zwangerschap of borstvoeding, ernstige zwangerschap of borstvoeding, ernstige zwangerschap of borstvoeding, ernst.

(2) Studieontwerp

1. Leverbiopsie en weefselcollectie:

   Echografie-geleide leverbiopsie bij 6 NAFLD-patiënten. Histopathologische evaluatie (HE, Masson -kleuring) voor NASH en fibrose (NAS en Scheuer scoren). Klinische gegevensverzameling en leverweefselopslag (-80 ° C).

2. Expressieanalyse van C-Kit en Mertk:

Immunofluorescentie co-kleuring van leverweefsels. 3. Statistische analyse: vergelijk C-Kit- en MertK-expressieniveaus bij milde en ernstige NAFLD-patiënten.

(3) inschrijving en workflow

1. Baseline gegevensverzameling:

   ①Demografische en klinische parameters: naam, geslacht, leeftijd, etniciteit, geboortedatum, lengte, gewicht, ziektebegin, contactgegevens.

   ② Laboratoriumtests: CBC, ALT, AST, TBIL, TG, cholesterol, glucose, totaal eiwit, albumine.

   ③clinische beoordelingen: bloeddruk, BMI, buik -echografie, fibroscan.

2. Biopsieprotocol:

   • Echografie-geleide percutane leverbiopsie binnen 1 maand na inschrijving. ②Tissue Specimen Vereisten: ≥3 mm diameter, 5-8 mm lengte. ③Storage: -80 ° C voor C -Kit- en MertK -genanalyse.

IV. Verwachte resultaten verduidelijken de regulerende relatie tussen C-Kit (+) LSEC's en de Gas6-MertK-signaalroute in leverweefsels van NAFLD-patiënt.