O efeito melhorativo das células endoteliais hepáticas c-kit (+) com deficiência de MERTK na esteato-hepatite não alcoólica

I. Antecedentes do estudo A doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) tornou-se um dos distúrbios hepáticos mais prevalentes em todo o mundo [1]. Apesar de sua alta incidência e gravidade, atualmente não existem agentes terapêuticos eficazes. Os tratamentos existentes se concentram no alívio sintomático, como hepatoproteção e redução de enzimas, em vez de abordar a patogênese subjacente [2]. Portanto, elucidar os mecanismos que impulsionam a progressão da esteato-hepatite não alcoólica relacionada à NAFLD (NASH) e fibrose hepática é crítica para o desenvolvimento de estratégias preventivas, melhoradoras ou mesmo curativas, com importância estratégica significativa.

1. Papel dos LSECs na patogênese da NAFLD:

   As células endoteliais sinusoidais do fígado (LSECs), os componentes primários do endotélio sinusoidal hepático, formam uma troca de substâncias reguladoras de barreira física entre o parênquima hepático e a circulação. Como células endoteliais altamente especializadas (CEs) e as células não parenquimais mais abundantes (NPCs) no fígado, os LSECs desempenham papéis centrais na fisiopatologia hepática [3-4]. A função LSEC direcionada representa uma abordagem promissora para mitigar a progressão e complicações da NAFLD.

2. Características transcriptômicas heterogêneas das subpopulações LSEC na DHGNA:

   O sequenciamento de RNA de célula única (scRNA-seq) permite a amplificação e sequenciamento em todo o genoma no nível de célula única. No fígado, os hepatócitos (HCs) e os NPCs exibem heterogeneidade transcriptômica acentuada, subjando a zonação metabólica e funcional. Isso destaca o potencial da análise de célula única no entendimento de doenças hepáticas [5]. No entanto, os estudos de SCRNA-Seq sobre LSECs na DHGNA permanecem inexplorados.

3. Hipótese: C-Kit (+)/Gas6 (-)-A subpopulação LSEC exacerba a NAFLD via regulação mediada por GAS6/MERTK da mitofagia rosa1:

As células progenitoras endoteliais derivadas da medula óssea (EPCs), marcadas pelo C-KIT (CD117), podem expressar C-kit em ECs em condições patológicas [6]. Gas6, um ligante para os receptores TAM (Tyro3, ​​AXL, MERTK), ativa as cascatas de sinalização a jusante que regulam a migração celular, a inflamação, a sobrevivência e a mitofagia [7]. Na DHGNA, o GAS6/MERTK exibe papéis específicos de células [8-10]: anti-inflamatório em macrófagos hepáticos; Pró-fibrótico em células estreladas hepáticas (HSCs); Protetor em hepatócitos (HCs). No entanto, o papel do GAS6/MERTK nos LSECs durante a NAFLD permanece desconhecido. A disfunção mitocondrial é uma marca registrada da NAFLD [11] e a mitofagia prejudicada (por exemplo, deficiência de PINK1) exacerba a inflamação hepática, esteatose e fibrose [12]. Evidências emergentes sugerem que o GAS6/MERTK aumenta a mitofagia para preservar a função mitocondrial. Por exemplo, os ratos MERTK-/- exibem disfunção mitocondrial de cardiomiócitos [13], e Gas6 promove a mitofagia [14].

Nossos dados preliminares de scRNA-seq de camundongos HFD/ND identificaram um c-kit (+)/gas6 (-)-subpopulação LSEC exclusiva. Esses LSECs induziram comprometimento da mitofagia em HCs/HSCs co-cultivados, manifestando-se como senescência mitocondrial, estresse oxidativo, ativação do HSC, deposição lipídica de HC e inflamação. Investigar como essa subpopulação impulsiona a progressão da NAFLD revelará novos mecanismos fisiopatológicos e alvos terapêuticos, formando a base deste estudo.

Ii. Objetivos do estudo para elucidar os níveis de expressão de pares de receptor de ligante C-Kit e Gas6/MERTK em tecidos hepáticos de pacientes com DHGNA.

Iii. Procedimentos de estudo

(1) Critérios de inclusão e exclusão

1. Critérios de inclusão: diagnóstico de NAFLD por diretrizes para a prevenção e tratamento da doença hepática gordurosa não alcoólica (edição de 2018). Idade de 18 a 65 anos.
2. Critérios de exclusão: cirrose (compensada ou descompensada), carcinoma hepatocelular, hepatite viral ativa (HBV, HCV), colangite biliar primária, esclerosas primárias de colangite, histórico recente de uso de drogas ilícitas, ingestão de álcool ou de severas e acaos para os homens, para os homens, o uso de drogas ilícitas, a ingestão de álcool.

(2) Projeto do estudo

1. Coleção de biópsia e tecido hepática:

   Biópsia hepática guiada por ultrassom em 6 pacientes com DHGNA. Avaliação histopatológica (HE, Masson coloração) para Nash e fibrose (NAS e pontuação de Scheuer). Coleta de dados clínicos e armazenamento de tecido hepático (-80 ° C).

2. Análise de expressão de C-Kit e Mertk:

Co-coloração de imunofluorescência de tecidos hepáticos. 3. Análise estatística: Compare os níveis de expressão de Kit e Mertk em pacientes com NAFLD leve e grave.

(3) Inscrição e fluxo de trabalho

1. Coleta de dados de linha de base:

   ① Parâmetros Demográficos e Clínicos: Nome, sexo, idade, etnia, data de nascimento, altura, peso, início da doença, informações de contato.

   ② Testes de laboratório: CBC, ALT, AST, TBIL, TG, colesterol, glicose, proteína total, albumina.

   Avaliações clínicas: pressão arterial, IMC, ultrassom abdominal, fibroscana.

2. Protocolo de Biópsia:

   • Biópsia hepática percutânea guiada por ultrassom dentro de 1 mês após a inscrição. ② Requisitos de amostra de teatro: ≥3 mm de diâmetro, 5-8 mm de comprimento. ③Storage: -80 ° C para análise do gene C -kit e MERTK.

4. Os resultados esperados esclarecem a relação regulatória entre os LSECs C-kit (+) e a via de sinalização GAS6-MERTK nos tecidos hepáticos do paciente com NAFLD.